复方扶芳藤合剂对大鼠骨髓间充质干细胞wnt信号通路影响

《复方扶芳藤合剂对大鼠骨髓间充质干细胞wnt信号通路影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．2Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7jE文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9实验一BMSCs的分离、培养、纯化和鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91实验

2、材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．92实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1O3结果⋯吖⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯164讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．20实验二复方扶芳藤合剂对BMSCs的WNT信号通路影响⋯⋯⋯⋯⋯．．251实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．252实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．263结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．304讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．34结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．53问题与展望⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．54参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯55综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．63致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．77攻读学位期间发表的学术论文目录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯．78广西中医学院研究生学位论文作者声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．79个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．80中文摘要目的：本研究采用体外细胞培养技术，建立大鼠骨髓间充质干细胞(Bonemesenchymalstemcells，BMSCs)的体外培养体系；通过观察复方扶芳藤合剂含药血清对骨髓间充质干细胞增殖过程中WNT信号通路的调控作用，阐明复方扶芳藤合剂对BMSCs增值作用的机理，探索中药复方抗衰老的新途径。方法：1．运用全骨髓贴壁法分离培养纯化BMSCs，通过细胞形态观察不同阶段细胞生

5、长特征。2．通过台盼蓝染色法检测BMSCs的活性。3．MTT法绘制细胞生长曲线检测BMSCs的增殖活性。4．流式细胞仪检测BMSCs表面抗原标志和细胞周期。5．在成骨诱导液诱导下观察BMSCs向成骨细胞分化能力。6．将30只SD大鼠随机分为二组，每组15只，分别为复方扶芳藤合剂灌胃的药物干预组和生理盐水灌胃的阴性对照组；取灌胃后10％药物血清及阴性对照组的血清分别对骨髓间充质干细胞进行干预，运用MTT法检测复方扶芳藤合剂对大鼠BMSCs增殖的影响。7．通过RT-PCR检测Wnt3a、13-catenin、c．myc的mRNA

6、表达水平在干预前后的表达变化。8．通过免疫细胞化学方法检测Wnt3a、13-catenin、c-myc的蛋白在干预前后的表达变化。结果：1．显微镜下观察贴壁生长的BMSCs形态呈长梭形，呈融合成放射状或旋涡状，均匀一致。2．通过台盼蓝染色法检测BMSCs的活性率为98．7％。3．BMSCs生长曲线分析结果显示接种后第3天细胞进入指数增长期，至第7天进入平台期。4．流式细胞仪检测BMSCs细胞周期检测结果显示Go／Gl期的细胞约占88．45％。显示BMSCs均一地表达细胞表面抗原CD44、CD90、CDl05，fEl,}生率分

7、别为99．32％，99．33％，99．36％：2而CD34呈阴性，阳性率为1．45％。5．经成骨诱导液定向诱导分化后，细胞呈现成骨细胞的表型特征。6与生理盐水阴性对照组相比，复方扶芳藤合剂含药血清可明显促进BMSCs增殖(P<0．05)。7．RT-PCR显示药物干预组Wnt3a、13-catenin、c．myc的mRNA表达水平均高于阴性对照组(P<0．05)。8．免疫细胞化学显示药物干预组Wnt3a、13-catenin、c-myc蛋白表达均高于阴性对照组(P<0．01)。结论：1．采用全骨髓贴壁法可获得纯度高、活性好的大

8、鼠骨髓间充质干细胞，建立了稳定培养体系，为我们对干细胞研究提供可靠的细胞来源。2．复方扶芳藤合剂含药血清可促进BMSCs的增殖；在BMSCs增值过程中，复方扶芳藤合剂含药血清可以使Wnt3a、13-catenin、c-myc的mRNA及蛋白的表达上调，从而激活WNT信号通路。复方扶芳藤合剂