wnt3a信号分子对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程中端粒酶活性的影响

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1、中国骨质疏松杂志2014年1月第2O卷第1期ChinJOsteoporos，January2014，Vol20，No．1PublishedonlineWWW．wanfangdate．com．cndoi：10．3969／j．issn．1006—7108．2014．O1．00833·论著·Wnt3a信号分子对大鼠骨髓问充质干细胞成骨分化过程中端粒酶活性的影响胡江伟王亮马远征张妍杨帆杨国花王文娇付雪梅解放军第309医院全军骨科中心骨内科，北京100091中图分类号：R68文献标识码：A文章编号：1006-7108(2014)O1．0033—05摘要：目的探索Wnt

2、3a信号分子对体外培养的大鼠骨髓问充质干细胞成骨分化过程中端粒酶活性的影响。方法采用密度梯度离心联合贴壁筛选法分离培养SD大鼠股骨骨髓间充质干细胞。传代后通过形态学和流式细胞学检测细胞表面标志物CD29、CD44、CD45，筛选并鉴定细胞。采用成骨诱导培养基联合不同浓度的wnt3a(5ng／mL、25ng／mL、100ng／mL)诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化，以碱性磷酸酶活性检测评价其成骨分化能力。通过TRAP—ELISA端粒酶活性检测法检测在不同浓度的wnt3a干预下诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中端粒酶活性的表达。结果骨髓间充质干细胞传至第3代后

3、可获得均一性较高的细胞，流式细胞学检测细胞表面标志物CD29、CD44高表达，CD45低表达。成骨诱导培养基联合不同浓度的wnt3a诱导大鼠BMSCs7d后，碱性磷酸酶(AlkalinePhosphatase，ALP)活性检测结果：与普通成骨诱导培养基相比，含有5ng／mL及25ng／mLwnt3a的成骨诱导培养基可显著增加其碱性磷酸酶(ALP)活性(P<0．05)，而含有100ng／mLwnt3a的成骨诱导培养基则明显抑制其碱性磷酸酶(ALP)活性(P<0．05)。与普通成骨诱导培养基相比，联合诱导培养基诱导骨髓间充质干细胞成骨分化过程中，端粒酶活性的改变

4、无明显的统计学差异。结论小剂量(5ng／mL、25ng／mL)的wnt3a分子能够促进体外培养的骨髓间充质干细胞成骨分化，而大剂量(100ng／mL)的wnt3a分子则抑制其成骨分化。骨髓间充质干细胞具有较弱的端粒酶活性，成骨分化过程中其活性逐渐减弱，直至消失；wnt3a信号分子刺激并不能有效激活其端粒酶活性。关键词：wnt3a；骨髓间充质干细胞；成骨分化；端粒酶EffectofWnt3asignalingmoleculesontheactivityoftelomeraseduringtheosteogenicdifferentiatiOnofbonemar

5、rowmesenchymalstemcellsinratsHUJiangwei，WANGLiang，MAYuanzheng，ZHANFYan，YANGFan，YANGGuohua，WANGWenjiao，FuXuemeiDepartmentofOrthopedics，the309HospitalofPLA，Beijing100091，ChinaCOrrespOndingauthor：WANGLiang，Email：wangl309@sina．comAbstract：ObjectiveToexploretheeffectofWnt3asignalingmole

6、culesontheactivityoftelomeraseduringtheosteogenicdifferentiationofratbonemalTOWmesenchymalstemcells(BMSCs)invitro．MethodsBMSCsofthefemurofSpragueDawleyratswereisolatedusingthedensitygradientcentrifugationcombinedwithadherencescreeningmethod，andthenculturedinvitro．Afterpassaging，cel

7、lsurfacemarkersCD29，CD44，andCD45weredetectedusingmorphologyandflowcytometry．Thecellswerescreenedandidentified．CellswereculturedwithosteogenicinducingmediumcombinedwithdifferentconcentrationsofWnt3a(5ng／mL，25ng／mL，and100ng／mL)，inordertoinducethedifferentiationofBMSCs．theactivityofAL

8、Pwasdetectedtoevaluatethec