mirnas对骨髓间充质干细胞分化的影响

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1、学校代码：10023学号：200501071miRNAs对骨髓间充质干细胞分化的影响专业年级：北京协和医学院临床医学专业2005级姓名：于鹏导，师：翁习生教授临床学院(北京协和医院)骨科教研室完成日期：2013年6月1独创性声明IIIIlUlIIIIIlY2380947本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示

2、谢．]￡思o、、学位敝作者签名：寸签字日期：了功／乡年／月／驴日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解j匕立迹塑医堂瞳有关保存、使用学位论文的管理办法。有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权j量塞迹塑医堂院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：签字日期：)房年式鹇门陶’《)B

3、寥日导师签名：似膨亥签字日期：劲，乡年刃日学位论文作者毕业后去向：工作单位：北京协和医院电话

4、：13331074881通讯地址：北京市东城区东单北大街帅府园壹号北京协和医院骨科邮编：10073023目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。5MIRNAS对骨髓间充质干细胞成脂分化的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9实验一人骨髓间充质干细胞的复苏、培养、传代及糖皮质激素调控的MIRNA的筛选⋯⋯⋯．儿第一部分人骨髓间充质干细胞的复苏、培养、传代⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯111．1．1材料⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一111．1．2方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一121．1．3结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．121．1．4．讨沦⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13第¨二部分利用生物信息学方法对BMSC成脂分化相关MIRNAS的筛选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131．2．3结果与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯19实验二BMSC的瞬时转染及油红O、茜素红、¨型胶原染色⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯212．1．1BMSC的转染⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一222．2油红O染色评价MIRNA对BMSC成脂分化的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯242．3茜素红染色评价MIRNA对BMSC成骨分化的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯242．4II型胶原染色评价MIRNA对BMSC成脂分化的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．252．5实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯272．6讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27实验三HAS·MIR一1303的功能研究——全基因组芯片对MIR一1303靶基因及作用通路的识别⋯．．283．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯293．2结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37文献回顾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯554中文摘要研究背景miRNA(microRNA)是一类短小

8、的非编码单链小分子RNA，通过转录后调节对基因表达发挥着重要调控作用。多项研究表明，miRNA在细胞增殖、分化、凋亡、分泌、迁移、恶性转化等细胞功能方面存在重要调控功能，在生物体的生长发育、信号转导通路、组织器官分化、疾病的发生发展等复杂的生物学过程中亦扮演着重要角色。骨髓间充质干细胞(BMSC)是一类具有多向分化潜能的干细胞，可以分化为多种中胚层细胞及数种非中胚层细胞。已经有很多研究证明骨髓间充质干细胞分化异常在诸如股骨头坏死、骨质疏松等疾病当中扮演着重要角色。miRNA通过对大量基因进行转录后调控，对骨髓间充质干细胞的分化方向产生重要的调

9、控作用。本研究拟在本课题组前期研究的基础上对此前筛选出的miRNAs进行功能验证，明确其对骨髓间充质干细胞分化方向的影响。研究目的1．复苏、培养、传代BMSC，用生