地塞米松对骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响

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1、兰州医学院硕士学位论文地塞米松对骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响姓名：刘杰申请学位级别：硕士专业：外科学（骨外）指导教师：孙正义;王栓科2003.4.1兰州医学院fi6111学位论义地塞米松对骨髓问充质干细胞增殖和分化的影响摘要目的分离培养并鉴定小鼠骨髓间充质干细胞：研究地塞米松对体外培养的骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响。方法分离j～7周龄昆明小鼠双侧股骨，用预冷的IMDM培养基冲洗出瞥髓，采用全骨髓培养法，以1×104个／cm?接种于25ml培养瓶内。接种约6～q天后，形成单层贴壁成纤维状细胞，覆盖培葬瓶壁约70％～80％的面积。用葛三代传代细胞行各种组织特异性染色，进行培

2、养细胞的鉴定以及进行细胞生长曲线的测定。在此基础上，在培养基内添加l×10“mol／乙的地塞米松，将细胞置入CO：孵箱中培养，同时做不加药的空白对照。通过倒鼍相差显微镜观察骨髓间充质干细胞增殖和分化情况，检测上清液中碱性磷酸酶和骨钙索含量。结果用全骨髓培养法获得的细胞，行各种组织特异性染色后证实，该细胞非脂肪细胞、非软骨细胞、非成骨细胞、非成纤维细胞。经诱导培养后，方具有成骨细胞特性。所以可断定，本实验培养细胞为骨髓间充质干细胞。由生长曲线可知，加入1×10“mol／L地塞米松后，骨髓间充质干细胞的倍增时间，由36h延长为54h。进一步研究表明，在地塞米松浓度为l×10一mol

3、／L，骨髓闯充质干细胞密度为l×105／ml的培养条件，上清液中碱性磷酸酶(实验组分别为：2．96+0．07，3．12±O．16，3．23±O．27，4．47±0．31，6．21±O．14：对照组分别为1．07±0．23，I．13±0．12，1．34±0．25，1．70_0．18．!11±O．24)和骨钙素(实验组分别为：未测出，O．42±0．10，0．57±0．2，兰州阪学院硕．卜学位论史o．84±o．13，1．36±o．31：对照组分别为：未测出，未测出，未测出，未测出，未测出)含量增加，骨结节形成加速，与未加药的对照组相比均统计学有显著性差异。结论本实验条件下，可以通过全

4、骨髓培养法获得骨髓间充质二r细胞。该细胞体外生长稳定．传代后细胞适应性强，增殖较快，具有向成骨细胞分化的潜能。地塞米松抑制了骨髓间充质干细胞的增殖，延长了细胞倍增时间。但是，它可以促进其向成骨细胞其分化，大量表达成骨细胞特异性物质(ALP，OCN)，并且随着培育时间的延长，促进钙质沉着，迅速形成骨结节。关键词细胞培养，种子细胞，地塞米松，骨髓间充质于细胞分化，增殖兰¨{限学院娥{：学位论文Theeffectsofdexamethasoneonbiologicalcharacteristicsofbonemesench3，realstemcellsAbstraetobjectiv

5、eTocultureandidentifymicemesenchymalstemcellsfMSCs)．Theeffectsofdexamethasoneonthemesenchyrealstemceilsproliferationanddif·feremiatiohinvitrowereobservedandanalyzed．MethodsAfterthefemursweredissectedfrom5to7．week．oldmites．thebonenlalTov,wasflushedOUtwitllice·coldIMDMmedium．TheeelJwasplatedin

6、25mlcultureplateatl×l酽／mlandcultured蛀llt酝fibroblast-shapedcellsco、，ered60％一70％oftheculturedplatedafter6to8-day．The3rdpassengerwasstained磅tissuespeeifieialstaininginordertoidentifyculturedceils，andthecellgrowthCUlWewasobserved．The3rdpassagercellswereincubatedundertheconditionof37"C．95％relativ

7、ehumidityand5％C02．Subsequently，lx10喀mol／Ldexamethasone

8、‘。asaddedintoculturemediumtofeedagroupofmesenc-hymalstemcellsandthecomrolgroupswerecultured、vithomthemedicineatthesametime。Thedifferentiationandproliferationofthegroupswereobsen，edcontinuall3’u