骨碎补总黄酮对骨髓间充质干细胞增殖与骨向分化的影响

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1、摘要论文题目：骨碎补总黄酮对骨髓间充质干细胞增殖与骨向分化的影响专业：内科学硕士生：刘君静指导教师：舒晓春摘要目的：建立大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的体外培养体系，探索不同浓度骨碎补总黄酮对大鼠BMSCs增殖与骨向分化的作用，并进一步观察骨碎补总黄酮作用于大鼠BMSCs后对成骨相关基因BMP2mRNA表达的影响。方法：1．全骨髓贴壁法对BMSCs进行分离纯化，从形态学、表面抗原表达、细胞周期等生物学特性进行BMSCs鉴定。2．在含有不同浓度骨碎补总黄酮的条件培养基中，对大鼠BMSCs进行培养，采用MTT

2、方法对各浓度组BMSCs的增殖进行检测。3．不同浓度骨碎补总黄酮作用于BMSCs7天和14天后，检测碱性磷酸酶(ALP)的含量，并初步确定骨碎补总黄酮在BMSCs骨向诱导中的最佳浓度，并进一步对最佳浓度组进行ALP及矿化结节染色，以定性鉴定BMSCs诱导为成骨细胞。4．在骨碎补总黄酮最佳浓度组作用BMSCs7天和14天后，采用实时荧光RT-PCR的方法，检测成骨相关基因BMP2mRNA的表达情况。结果：1．全骨髓接种48／J,时后多数贴壁细胞已完成贴壁，14天后达到85％融合。流式细胞仪检测结果显示，第3代细

3、胞Go／Gl期中细胞占95．29％，G2／M期为4．17％，S期为0．55％；其中细胞表面抗原阳性标志CD29占97．68％，阴性标志CD45、CD34分别为2．76％、7．93％。2．M1vr检测显示不同浓度组中以10‘49／1、10巧∥l组促增殖作用明显，与无药物对照组比较，有显著性差异(P<0．05)，其中以10巧∥l浓度组作用最显著。3．ALP定量检测中，同无药对照组相比，7天时1049／1，10一g／1、10’69／l'旨碎补总捅要黄酮组ALP表达明显增多(P

4、；而14天时10之g／1、10‘4∥1、10。5∥l、10‘6∥l组表达明显增多(PO。05)，且各组ALP表达量均较7天时增加。综合各组对BMSCs增殖和分化影响的检测结果，10。5∥l浓度组为促BMSCs骨向分化的最佳浓度组。4．以骨碎补总黄酮最佳浓度组对BMSCs进行诱导，ALP染色及矿化结节染色均显示阳性，无药对照组为阴性。5．同无药物对照组相比，骨碎补总黄酮作用于BMSCs7天后BMP2mRNA的表达上调作用较弱，在14天后

5、其上调作用明显增强(P值<0．05)。结论：1．采用全骨髓贴壁分离法可获得较为纯净的BMSCs。2．10‘4∥1、10。5∥l骨碎补总黄酮组促BMSCs增殖作用明显，以10。59／1,浓度组作用最好。3．10艺∥l、10‘4∥l，10。5∥l、10石∥l骨碎补总黄酮均有促BMSCs向成骨细胞分化作用，其作用随骨碎补总黄酮浓度降低及时间延长而增加，其中以10弓朗、10石酣骨碎补总黄酮最明显。4．10巧鲋骨碎补总黄酮为诱导BMSCs向成骨细胞分化的最佳浓度。5．10。5∥l骨碎补总黄酮能够上调BMP2mRNA的表

6、达，提示骨碎补总黄酮诱导BMSCs骨向分化的可能作用机制。关键词：骨碎补总黄酮，骨髓间充质干细胞，增殖，分化，骨质疏松症IIABSTRACTTitle：TheEffectofTotalFlavonoidsofRhizomaDrynariaeonProliferationandobjeetiveOsteogenesisofCulturedBoneMasenchymalStemCellsMajor：InternalmedicineName：LiuJunjingSupervisor：ShuXiaochunTiffs

7、studyestablishedaculturesysteminvitroofratbonemarrowmesenchymalstemcells(BMSCs)andexploredtheeffectofdifferentconcentrationsoftotalflavonoidsofrhizomadrynariaeonproliferationandosteogenesisoftheculturedratBMSCs．Furthermore，itstudiedtheexpressionofBMP2mRNAin

8、ratBMSCsculturedinmediumwithtotalflavonoidsofrhizomadrynariae．Method1．BMSCsfromratbonemarrowwereisolatedandpurifiedbyusingdifferentialattachmenttechnique，andidentifiedbythebiologicalcharacteristicsucha