β3-ar对心肌细胞凋亡的影响及介导机制研究

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1、类号：R54密级：公开学号：2012109066单位代码：10759石河子大学硕士学位论文β3-AR对心肌细胞凋亡的影响及介导机制研究学位申请人马苗苗指导教师王丽申请学位门类级别医学硕士学科、专业名称内科学研究方向冠心病的基础与临床研究所在学院医学院中国·新疆·石河子2015年06月Studyofβ3-AReffectonmyocardialcellapoptosisandmediatedmechanismADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsf

2、ortheDegreeofMasterofMedicineByMaMiaomiaoInternalmedicineDissertationSupervisor:Pro.WangLiJune，2015石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：2015年6月10日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留

3、、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权交学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：2015年6月10日导师签名：时间：2015年6月10日摘要目的：采用去甲肾上腺素（noradrenaline，NE）诱导心肌细胞凋亡，分别应用β3-AR激动剂及阻滞剂进行干预，观察β3-AR对心肌细胞凋亡的影响，探讨β3-AR与PI3K/Akt和p38MAPK信号通路对心肌细胞凋亡的

4、作用，为β3-AR的信号通路研究提出新的理论。方法：使用优化的Ⅱ型胶原酶和差速贴壁法分离培养心肌细胞，分别用总蛋白法、超速离心法、试剂盒法提取心肌细胞β3-AR膜蛋白。BCA法进行蛋白定量，Westernblot法检测蛋白样品中β3-AR提取蛋白的特异性。实验分组：正常对照组；NE诱导组：NE培养48h；BRL组：β3-AR激动剂（BRL37344）干预+NE培养48h；SR组：β3-AR阻滞剂（SR59230A）干预+NE培养48h。TUNEL法及流式细胞仪双染法检测心肌细胞凋亡率；Westernblot检测各组凋亡相关因子Bcl-2、Bax和caspases

5、-3蛋白的表达；Westernblot和qRT-PCR检测各组PI3K/Akt和p38MAPK信号通路蛋白和mRNA的表达。结果：1.优化心肌细胞的培养方法可获得产量大、浓度高的细胞，能满足后续实验；2.与其他组比较，试剂盒法提取蛋白的浓度最高，差异均有统计学意义（P<0.05）；Westernblot检测结果示：与其他组比较，试剂盒提取法所得β3-AR膜蛋白含最高，差异均有统计学意义（P<0.05）；3.TUNEL法及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率：BRL组细胞凋亡率明显增高，与NE诱导组比较，差异有统计学意义（P<0.05）；4.Westernblot检测结果

6、示：BRL组caspases-3和Bax/Bcl-2比值增高，与NE诱导组比较，差异有统计学意义（P<0.05）；5.Westernblot检测结果示：BRL组磷酸化的p38MAPK蛋白表达增高，与NE诱导组比较，差异有统计学意义（P<0.05）；SR组磷酸化的Akt蛋白表达增高，与NE诱导组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：1.试剂盒提取法可有效提高β3-AR膜蛋白的浓度和特异性；2.β3-AR可促进体外培养NE诱导的心肌细胞凋亡；3.β3-AR过度激活可通过下调PI3K/Akt信号和上调p38MAPK信号通路促进心肌细胞凋亡。关键词：心肌细胞；β

7、3肾上腺素能受体；细胞凋亡；Akt；p38MAPKIAbstractObjective:Aimedtodeterminetheeffectsofβ3-ARonthepromotionofapoptosisandonnorepinephrine(NE)injurythoughtβ3-adrenoceptoragonistandβ3-adrenoceptorinhibitor.Toexplorewhethertheβ3-ARmediatemyocardialapoptosiscontactwithPI3K/Aktandp38MAPKpathwayanditmaypu

8、tforwardanew