三七总皂苷对ggo诱导h9c2心肌细胞凋亡的影响及机制研究

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1、硕士学位论文三七总皂苷对G/GO诱导H9c2心肌细胞凋亡的影响题目及机制研究Studyoftheanti-apoptoticeffectandmechanismofpanaxnotoginsengsaponinonH9c2英文题目cardiomyocytesinducedbyglucose/glucoseoxidase姓名蔡诗婷学号11020045所在学院医学院导师姓名杨敏专业药理学入学日期2010.9.1答辩日期学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其

2、它机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日汕头大学医

3、学院硕士学位论文中文摘要目的虽然有大量的研究已经发现三七总皂苷（panaxnotoginsengsaponin，PNS）具有心血管方面的保护作用，但关于其在糖尿病性心肌病中的作用以及具体的分子机制的报道尚少，而且已有的研究基本都表明PNS保护心肌的作用主要都是与其抗氧化作用有关系，比如降低ROS水平和升高SOD水平等，本课题拟探讨PNS对葡萄糖/葡萄糖氧化酶诱导的心肌细胞凋亡是否有抑制作用，以及其可能分子作用机制。方法（1）葡萄糖/葡萄糖氧化酶（G/GO）诱导H9c2心肌细胞凋亡模型的建立：采用不同浓度的葡萄糖/葡萄糖氧化酶体系干预诱导H9c

4、2心肌细胞12h，光学显微镜下观察H9c2细胞形态学，MTT比色法检测细胞的存活率，AnnexinV/PI结合流式细胞仪检测细胞凋亡率。（2）三七总皂苷对G/GO诱导H9c2心肌细胞凋亡的影响：将H9c2细胞分为对照组（control），模型组（model）和PNS不同浓度（0.5g/L，0.75g/L，1g/L，2g/L，2.25g/L和3.75g/L）组。Control组细胞用含10%血清的DMEM/LowGlucose培养基于普通二氧化碳培养箱培养，model组细胞用DMEM/LowGlucose培养基同时给予G/GO（33mM/2mU

5、）培养，给药组细胞造模前6小时给予不同浓度的PNS溶液进行预处理。AnnexinV/PI结合流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率；JC-1染色检测线粒体膜电位；DCFH-DA染色检测胞内ROS水平。（3）三七总皂苷对G/GO诱导H9C2心肌细胞凋亡的保护作用的机制：将H9c2细胞分为对照组（control），模型组（model）和PNS（2g/L）组。实时荧光定量PCR检测心肌细胞中下列线粒体生物合成相关基因：过氧化物酶体增生物激活受体γ辅激活因子-1α（PGC-lα）、核呼吸因子l（NRF1）、线粒体转录因子A（Tfam）和线粒体DNA编码的细胞

6、色素C氧化酶亚单位I（COXI）的mRNA表达水平。Westernbolt检测AMPK、磷酸化AMPK（p-AMPK）的表达水平。结果（1）随G/GO浓度增加，H9c2细胞的存活率逐渐降低，其中1.6mU/mL、2mU/mL、2.4mU/mL和2.8mU/mL组存活率显著低于对照组（P<0.05），其中G/GO（33mM/2mU）的存活率为45.3%±6.7%。（2）随G/GO浓度增加，H9c2细胞的细胞凋亡率逐渐升高，细胞呈现典型的凋亡特征，其中1.6mU/mL、2mU/mL、2.4mU/mL和2.8mU/mL凋亡率显著高于对照组（P<0.

7、05），其中G/GO（33mM/2mU）的细胞凋亡率为44.56%±3.02%，是I汕头大学医学院硕士学位论文造模的理想浓度。（3）PNS能够抑制G/GO诱导的心肌细胞凋亡，且在一定范围内呈剂量依赖性。各组细胞凋亡率分别为：control8.18%±2.16%，model48.20%±1.80%；PNS各个浓度组的细胞凋亡率分别为37.34%±0.77%、31.14%±3.23%、33.00%±2.81%、20.98%±5.20%、24.40%±0.56%、21.90%±2.78%，综合参考临床治疗用量之后，选择PNS（2g/L）为进行后续研

8、究的理想浓度。（4）JC-1染色结果表明PNS具有稳定线粒体膜电位的作用，DCFH-DA染色结果显示PNS具有清除胞内ROS的作用。（5）PNS能够上调AMPK蛋白