三七皂苷对人骨髓造血细胞凋亡相关蛋白表达的影响

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1、三七皂苷对人骨髓造血细胞凋亡相关蛋白表达的影响作者：陈小红，高瑞兰，郑智茵，钱煦岱，徐卫红【摘要】本文研究观察三七皂苷（PNS）对造血细胞促进凋亡相关蛋白（Daxx、Fas）和抑制凋亡的核转录因子（NFkB、c-Rel）表达的影响，探讨PNS促进造血细胞增殖，支持生长存活的作用机制。采用半固体集落培养法观察PNS对人骨髓红系、粒系祖造血细胞（CFU-GM、CFU-E）的增殖作用，台盼蓝拒染法观察细胞的存活率，涂片染色法观察细胞形态学的变化，用流式细胞术分析细胞凋亡状况。同时，用PNS处理粒系HL-60、红系

2、K562、巨核系CHRF-288和Meg-014种细胞株后，提取胞浆蛋白和核蛋白，eg-01细胞Fas蛋白表达与对照相比，下降幅度分别为33.3%-71.4%。④NFkB、c-Rel蛋白除HL-60细胞对PNS诱导无明显变化外，其余细胞均出现不同程度地增加，分别提高了2.0-2.7倍和1.5-2.3倍。结论：PNS在某种程度上能够抑制Daxx、Fas蛋白表达，而相应减少造血细胞的凋亡，同时也能通过上调NFkB、c-Rel转录因子，促进细胞增殖，并阻止半胱天冬酶（caspase）连锁链的活化而抑制造血细胞凋亡

3、，这为PNS应用于临床治疗凋亡过度的疾病如再生障碍性贫血提供了可能性。【关键词】造血细胞　　ExpressionofApoptosis-relatedProtEinsintheHumanBoneMarroatopoieticCellsTreatedbyPanaxNotoginosides　　AbstractThestudyedtoinvestigatetheactionofPanaxNotoginosides(PNS，extractedfromnotoginsengherb)ontheexpressiono

4、ftheapoptosis-relatedprotEIns(Daxx，Fas)andtranscriptionfactors(NFkB、c-Rel)inthehematopoieticcellsandtoexplorethemechanismsofsupportingcellstosurvive.ThecolonyformationofCFU-GMandCFU-Einhumanbonemarroorphologyicroscope.TheAnnexin-VpositivecellsanmyeloidHL-6

5、0，erythroidK562，megakaryoidCHRF-288andMeg-01cellsg/L）for14days.ThenuclearorcytoplasmproteinofcellsonoclonalantibodiesagainstDaxx，FasorNFkB，c-Rel.Theresultsshoatopoieticprogenitorcells（CFU-GMandCFU-E）andfourcelllinesotedbyPNS;(2)afterthefourcelllinesotedbyP

6、NSandhungeredthroughorphologicalchangeandneitherthedetectionofAnnexin-Vpositivecells;(3)theexpressionofDaxxandFasproteincouldbeinhibitedbyPNS.NC）凋亡增加，Fas和FasL表达也明显增高，提示AA患者的发病与Fas、FasL系统有关［1，2］。三七皂苷（PNS）是中药三七的主要活性成分，我们已报道了PNS能够刺激人骨髓红系、粒系造血祖细胞增殖和分化［3］，改善再生障

7、碍性贫血小鼠的骨髓抑制并促进造血细胞增殖等［4］。本研究通过观察PNS处理前后对造血细胞凋亡相关的Daxx、Fas蛋白和核转录因子NFkB、c-Rel表达的影响，以探讨PNS促进造血细胞增殖，支持生长存活的作用机制，为临床应用提供可靠的理论依据。　　材料和方法　　药物　　三七皂苷注射液半固体造血祖细胞集落培养及PNS刺激试验　　将正常的人骨髓标本按本室已建立的方法作粒系祖细胞（CFU-GM）、红系祖细胞（CFU-E）培养，体系分别含粒－单核细胞集落刺激因子10μg/L（Strathmann）或红细胞生成素2

8、000U/L（麒麟鲲鹏中国生物药业），再加20％小牛血清（杭州四季青生物工程公司）和3g/L琼脂（Promega）的IMDM培养液。混匀后接种至24孔培养板，作3个复孔，均含105有核细胞/（0.5ml·l·g/L。培养7天后计数CFU-GM（>40个细胞）、CFU-E集落（>8个细胞）和细胞株的集落（>20个细胞）。　　人的造血细胞株液体培养及PNS诱导处理　　用HL-60、K562、CHRF