外源性视黄酸诱导乳鼠心肌细胞凋亡的研究

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1、分类号:R541学校代码:4510密级:公开编号：0902072硕士学位论文外源性视黄酸诱导乳鼠心肌细胞凋亡的研究学科专业:内科学研究方向:心血管疾病流行病学研究研究生姓名:聂园园学号:Y0902072学位类型科学学位导师姓名:仇小强教授二O一二年六月独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学

2、位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日----------------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解桂林医学院有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权桂林医学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采

3、用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国学术期刊（光盘版）电子杂志社、中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》、《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月-2-目录中文摘要………………………………………………………………2ABSTRACT……………………………………………………………4英汉缩略词对照表…………………………………

4、…………………………6前言……………………………………………………………………7实验一视黄酸诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的检测………………………8材料与方法………………………………………………………8结果…………………………………………………………………11讨论…………………………………………………………………14实验二RA对乳鼠心肌细胞Fas,Fasl,Caspase3,Pax-8表达的影响……17材料与方法…………………………………………………………………17结果……………………………………………

5、…………………………24讨论…………………………………………………………………27总结…………………………………………………………………30参考文献………………………………………………………………31综述……………………………………………………………………………34攻读学位期间发表的学术论文目录………………………………………41致谢……………………………………………………………………………42外源性视黄酸诱导乳鼠心肌细胞凋亡的研究中文摘要目的：研究外源性视黄酸（Retinoicacid,RA）对

6、乳鼠心肌细胞凋亡的影响，并研究乳鼠心肌细胞中Fas,Fasl,Casepase-3,Pax-8细胞调控因子的表达水平，分析RA诱导心肌损伤的机制。方法：1.体外培养乳鼠原代心肌细胞以及明确心肌细胞干预的最佳时间：在无菌条件下取出Balb/c乳鼠心脏，采用胰酶-差速贴壁法分离并纯化获得乳鼠心肌细胞，并进行原代心肌细胞培养。2.RA干预心肌细胞后进行指标的检测：设置的空白对照组为选用含20%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养心肌细胞；实验组分别使用含不同浓度视黄酸的培养基干预心肌细胞，在用药干预后的0

7、h、12h、24h、48h使用倒置显微镜观察心肌细胞形态并动态记录细胞搏动力；用MTT法来检测心肌细胞的抑制率；流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率；3.RA干预心肌细胞后Fas、Fasl、Caspase-3、Pax-8调控因子检测：Westernblot测定Fas、Fasl、Caspase-3、Pax-8蛋白的表达水平。RT-PCR检测Fas、FaslmRNA表达水平。结果：1.成功培养Balb/c乳鼠心肌原代细胞。培养72h的心肌细胞生长旺盛，表现为搏动力强，心肌细胞增殖逐渐进入平台期，为最佳的细胞

8、干预期。2.视黄酸浓度≥2umol/L时能显著抑制正常Balb/c乳鼠心肌细胞的生长，使细胞的搏动力减弱、凋亡增加，同时干预的药物浓度越高、时间越长，抑制越明显。3.与对照组相比，2umol/LRA组随作用时间的延长，Fas、Fasl、Caspase-3蛋白的表达逐渐增强（P<0.05）；与之相对应的是Pax-8蛋白的表达则逐渐降低（P<0.05）；Fas、FaslmRNA表达逐渐增强（P<0.05）。结论：1.采用胰酶-差速贴壁法及化学药物抑制法能获取存活率高、纯度高的心肌原代细胞；心肌细胞培