不同浓度乌司他丁对h2o2诱导的sd乳鼠心肌细胞凋亡的影响

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得研究成果，．其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名：黼带师签研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定

2、。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：磁嗣汇导师签目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3研究论文不同浓度乌司他丁对H：0：诱导心肌细胞凋亡的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯66日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l6附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18附表⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28综述抑制心肌细胞凋亡的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．33致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43中文摘要不同浓度乌司他丁对H202诱导的SD乳鼠心肌细胞凋亡的影响摘要目的：本实验建立H202诱导的心肌细胞凋亡模型，利用MTT比

4、色实验，流式细胞学技术，PCR法观察不同浓度乌司他丁对心肌细胞存活率，凋亡率，Bcl．2和Bax表达水平的影响。探讨乌司他丁对心肌细胞的保护作用机制。方法：1SD乳鼠心肌细胞的分离培养取出生1~3天清洁级健康SD大鼠，吸入乙醚麻醉后，75％酒精浴消毒皮肤，于剑突左旁横切口开胸取出心脏。取心室肌用PBS冲洗5遍，剪成lmm3小块，加入5倍心肌体积的胰酶和EDTA，放入37℃水浴锅振荡消化5min。收集上清液至含胎牛血清的DMEM中终止消化，重复操作6次，200目尼龙网过滤上清液，1000r／min，离心5min。弃上清，加入含胎牛血清DMEM重悬，接

5、种于培养瓶中。差速贴壁1h后，加入O．1mmol／LBrdu纯化心肌细胞，接种于培养板中。48h后换去含Brdu的培养基，以后每48h换液一次，倒置显微镜观察心肌细胞。培养第24h，多数心肌细胞呈梭形或三角形，出现无节律不同步的搏动。培养第48h，心肌细胞呈多角形，出现有节律不同步的搏动。培养第72h伸出突起相互连接交织成网，出现有节律同步搏动，频率多为80．140次／分。2实验分组心肌细胞培养第72h，把有节律同步搏动的心肌细胞随机分为四组。分别为空白对照组(N)、H202组(H)、乌司他丁1000U／ml组(WI)、乌司他丁3000U／ml组(

6、WII)。N组：加入等量培养液，孵育相同时间；H组：加入100pmoULH202孵育20min，弃上清，加入等量完全培养液孵育6h；WI组：加入100pmol／LH202孵育20min，弃上清，加入1000U／ml乌司他丁孵育6h；WII组：加入1009mol／LH202孵育20min，弃上清，加入3000U／ml乌司他丁孵育6h。6h后分别用MTT比色试验检测各组心肌细胞的存活率，流式细胞术检测各组心肌细胞凋亡率，RT-PCR法检测各组心肌细胞Bcl．2蛋白和Bax中文摘要蛋白mRNA的表达水平。采用SPSS13．0统计学软件进行分析，计量资料以

7、均数士标准差(x±S)表示，组间比较采用单因素方差分析，P<0．05为差异有统计学二亡巴O，思义。结果：1MTT比色实验检测心肌细胞存活率：与对照组相比，H组、WI组、WII组存活率均下降(P<0．05)；与H组比，WI、WII组存活率上升(氏O．05)；与WI组比，WII组存活率下降(P

8、减少(尸