槲皮素对人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡及其机制的研究

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1、学校代码10459学号或申请号密级专业博士学位论文槲皮素对人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡及其机制的研究作者姓名：肖鹏导师姓名：吴学建专业名称：外科学培养院系：郑州大学第一附属医院完成时间：2013年3月万方数据槲皮素对人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡及其机制的研究作者姓名：肖鹏导师姓名：吴学建教授学科门类：临床医学专业名称：骨外科学完成时间：2013年3月万方数据Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMaster（doctor）Theeffectsofquercetinonthea

2、poptosisofhumanrheumatoidarthritisfibroblast-likesynoviocytesandassociatedmolecularmechanismsBypengxiaoSupervisor:Prof.xuejianwuOsteologicalSurgeryMedicalSchoolMarch2013万方数据原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本

3、声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：肖鹏日期：2013年03月01日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：肖鹏日期：2013年03月01日万方

4、数据摘要槲皮素对人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡及其机制的研究摘要第一部分槲皮素对人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的影响目的：槲皮素（Quercetin）是一种天然的黄酮类化合物，具有抗炎和抗肿瘤的作用。本部分重点研究槲皮素对人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞（Rheumatoidarthritisfibroblast-likesynoviocytes,RAFLSs）凋亡（Apoptosis）的影响。为槲皮素治疗RA提供相关的理论依据。方法：39例新鲜的RA滑膜组织取材于郑州大学第一附属医院骨科因RA行全膝关节置换术的患者。RA的诊断标准符合美国风湿病学协会（ACR）修订的诊

5、断标准。RA病人的关节滑膜组织采用胰蛋白酶消化法分离类风湿性关节炎患者的滑膜细胞。用光学显微镜（Lightmicroscope）观察细胞的形态，流式细胞术（Flowcytometry,FCM）分析体外培养的RAFLSs表面标记的白细胞分化抗原3（Clusterofdifferentiation3，CD3）、CD19、CD14、以及CD90的表达情况。选用不同浓度的槲皮素（0,100,200,300μm）处理RAFLSs24小时。利用DNA片段化(DNAfragmentationassay)凋亡检测法检测槲皮素处理对RAFLSs凋亡率的影响。利用蛋白质印迹法（Westernblot）

6、检测槲皮素对RAFLSs中凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸酶-3(Caspase-3;激活型)和半胱氨酸天冬氨酸酶Caspase-9;激活型)的影响。并通过比较目的蛋白与内参蛋白（β-actin）的灰度比值研究槲皮素对RAFLSs中凋亡相关蛋白表达的影响。同时利用试剂盒检测Caspase-3和Caspase-9酶的活性。并计算不同槲皮素处理的RAFLSs中Caspase-3或者Caspase-9酶的活性与未处理组中对应的Caspase-3或者Caspase-9酶的活性的比值，研究槲皮素对I万方数据摘要RAFLSs中Caspase-3和Caspase-9酶活性的影响。利用流式细胞术以罗丹

7、明123（Rhodamine123）为荧光指示剂检测各种浓度槲皮素处理的RAFLSs中线粒体跨膜电位的变化（△ψm）情况，分析槲皮素对RAFLS线粒体跨膜电位的影响。Westernblot法检测RAFLS细胞质中细胞色素C（CytochromeC,cytC）的表达情况，通过计算与比较CytC/β-actin灰度比值分析槲皮素对RAFLS细胞质中CytC表达的影响。同时利用Westernblot法检测槲皮素对RAFLSs中促凋亡蛋白Bax（Bcl-2associated