赤芍801诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡研究

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1、中图分类号R一：fUDC硕士学位论文学校代码密级10533赤芍801诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡研究ApoptosisofRheumatoidArthritisFibroblast—LikeSynoviocytesInducedbyRadixPaeoniaeRubra801作者姓名：彭爱红学科专业：临床医学研究方向：临床检验诊断学学院(系、所)：湘雅二医院指导教师：蒋洪敏副教授论文答辩日期塑!±：』!望答辩委员会主席中南大学二O一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和

2、致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：荡压々砂日期：2生年』月笪日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服

3、务。作者签名：盔她导师签名缸日期：丝年』月羔日赤芍801诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡研究摘要目的：探讨赤芍801对类风湿关节炎(rheumatoidarthritis，RA)成纤维样滑膜细胞(Fibroblast—likesynoviocytes，FLS)凋亡的影响。方法：RA患者关节滑液经原代培养分离出FLS，取3．5代的RAFLS用于后续实验。MTT检测细胞增殖抑制。根据MTT结果，将细胞分为高剂量赤芍801组(64肛g／m1)、低剂量赤芍801组(4pg／m1)和溶剂对照组，光学显微镜观察其细胞形态；AnnexinV-FITC／PI双标记染色检测细胞

4、凋亡率；逆转录PCR和实时荧光定量PCR检测Fas／FaslmRNA相对表达量；细胞免疫化学方法对P65和P50表达定位进行分析；提取核蛋白，采用免疫印迹方法检测P65和P50表达。结果：经过反复贴壁与传代以后，3～5代滑膜细胞逐渐纯化，RAFLS在无赤芍801刺激下绝大多数为长梭形，少量呈星形、多角形，胞质透亮、均匀，核居中，排列具有局部方向性，低剂量赤芍801刺激24h后无明显改变，但高剂量赤芍801刺激后发生明显改变：细胞由长梭形变成了不规则形或圆形，细胞密度明显降低，体积缩小，核出现固缩，但胞膜和核膜完整。MTT结果显示，赤芍801具有浓度依赖性的抑制RA

5、FLS增殖功能，并在4}-tg／ml剂量下有统计学意义，P0．05，但高剂量组的凋亡率较对照组显著增加，具有统计学意义，P<0．05。逆转录PCR结果显示，FasmRNA在RAFLS中有表达，且有随赤芍801浓度增加而表达增加趋势，但FaslmRNA在RAFLS中未被检测出。实时荧光定量PCR结果指出，低剂量赤芍801刺激的RAFLSFasmRNA相对表达量较对照组增加不明显，差异无统计学意义，P>0．05，但高剂量差异显著，有统计学意义，

6、P<0．05。细胞免疫化学结果显示，P65和P50蛋白在无赤芍801刺激作用下，主要在RAFLS细胞浆中被检测出，但当高剂量赤芍801浓度刺激24h后，二者在细胞核中的量增加。Westemblotting结果指出，P65和P50在RAFLS核蛋白抽提物中被检出，并在高剂量赤芍801组中量显著高于对照组。结论：赤芍801具有诱导RAFLS凋亡功能并引起Fas基因表达上调和NF．v．B向核内转移。图7幅，表8个，参考文献43篇。关键词：类风湿关节炎；成纤维样滑膜细胞；凋亡；赤芍801分类号：R466．1ApoptosisofRheumatoidArthritisFib

7、roblast--LikeSynoviocytesInducedbyRadixPaeoniaeRubra801AbstractObjective：ToexploretheeffectofRadixpaeoniaerubra801(P801)ontheapoptosisoffibroblastlikesynoviosytes(FLS)frompatientswithrheumatoidarthritis(RA)．Methods：RAFLSwereprimaryculturefromarticulargenusynoviaofRApatients．Cellprolif

8、erati