βcatenin在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖机制中作用研究

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1、中山大学硕士学位论文中文摘要B．catenin在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖机制中作用研究【背景】专业：内科学硕士研究生：肖楚吟导师：潘云峰副主任医师中文摘要类风湿关节炎(rheumatoidarthritis，RA)是一种以关节滑膜为主要靶组织的慢性系统性炎症性自身免疫性疾病。关节滑膜衬里层增生，滑膜下层炎症浸润为其典型病理改变。其中类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(fibroblast．1ikesynoviocyte，FLS)是介导RA关节破坏的主要细胞。RA．FLS在慢性炎症过程中被激活后，出现细胞表型的显著改变，具有不完全转化细

2、胞的特性，即使脱离炎症环境，仍持续活化，增殖能力升高，逃脱接触抑制，具有侵袭的能力。RA．FLS体外培养数代后仍能持续自发产生大量细胞因子，这种自分泌、旁分泌的行为可能参与RA．FLS发生肿瘤样改变的机制。本课题设想RA．FLS的这种特性可能与同时具有调控转录和细胞间粘附功能的13．catenin相关。Wnt／Fz信号转导包含4条通路，其中Wnt／13．catenin通路在细胞活化、粘附、增殖中具有重要的作用，可以自分泌或旁分泌的方式起作用。B．catemn是该通路中的一个核心成员。在通路未激活状态下，其在胞浆内不断通过磷酸化、泛素化降

3、解而保持低水平。当该通路激活后，13．catenin不被降解而在胞浆中积聚，进入胞核，可作为转录激活因子激活TCF／LEF转录活性，启动相应基因的转录，从中山大学硕士学位论文中文摘要而引起细胞活化、细胞增殖等。13．catenin还可在细胞粘附连接处形成E．cadherin．13．catenin-Q．catenin复合体，介导细胞间粘附，其转录激活功能的增强与细胞粘附功能的丧失是密切相关的。已有研究发现RA滑膜、RA．FLS中Wnt信号分子表达升高，并介导某些细胞因子在RA．FLS中的表达增加。基于以上RA．FLS和B—catenin的

4、特性，以及前人的研究结果，提示B．catenin可能参与了RA．FLS增殖机制。【目的】明确13．catenin在RA．FLS细胞增殖机制中的作用。【材料和方法】收集行关节腔镜或关节置换术患者关节滑膜标本，RA组、骨关节炎(osteoarthrits，OA)组(OA组)、关节创伤组各6例。在三组标本中进行HE染色，应用免疫组化方法检测13．catenin在滑膜衬里层中的表达情况。同时将3组标本采用酶消化法或组织块法进行关节滑膜FLS的原代细胞培养并鉴定。三组选取行酶消化法分离培养的第三代FLS各3例进行后续实验。分别应用RT-PCR、W

5、esternblot方法检测三组FLS中13．catenin的mRNA表达和蛋白质表达，应用MTT法比较三组FLS的细胞增殖情况。对RA．FLS进行B．catenin的siRNA干扰。MTT法检测应用LiCI激活W州B．catenin通路后关节创伤组FLS细胞增殖的改变。【结果】在三组滑膜中应用酶消化法和组织块法均培养出FLS，HE染色证实所用组织均仅为滑膜组织，镜下观察>99％细胞呈成纤维细胞样，流式细胞仪检测CD55的表达均>99％。成功应用siRNA干扰的方法在RA．FLS中实现13．catenin的基Ⅱ中山大学硕士学位论文中文摘

6、要因沉默。免疫组化显示13．catenin在RA滑膜衬里层中表达的评分较对照组(OA组和关节创伤组)均明显增高，差异有统计学意义(P0．05)。MTT法检测结果显示，RA．FLS的细胞增殖较OA组、关节创伤组FLS增高。10mM浓度的LiCI刺激后，关节创伤组FLS的OD值较非刺激状态下增高，差异有统计学

7、意义(P

8、arthritisMajor：InternalmedicinePostgraduate：XiaoChuyinSupervisor：[BackgroundIAssociateProf．PanYunfengAb