小鼠成纤维样滑膜细胞原代培养的影响因素研究.pdf

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1、垒生箜卷—第8期JMedPostgra，Vo1．27，No．8。August．2014·789·论著(基础研究)小鼠成纤维样滑膜细胞原代培养的影响因素研究唐媚，常山，曹宗锐，罗兴燕，胡松，唐信威，王衍堂，刘阳，邹强【摘要】目的基因敲除小鼠已广泛用于关节疾病的研究中。文中探讨小鼠关节处理方式、消化酶种类及胶原酶消化时间3种因素对获取原代成纤维样滑膜细胞(fibroblast—likesynoviocytes，FLSs)数量的影响。方法将12只雄性SPF级小鼠，采用打开关节(6只)与不打开关节(6只)的方法处理双后肢，使用Ⅳ、Ⅱ型胶原酶

2、消化分离原代细胞，差速消化法逐代纯化FLSs。倒置显微镜观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞种类、活力与纯度。结果不打开关节处理获得的FLSs数量[(24933±503)个]显著高于打开关节处理获得的数量[(19133±115)个]，差异有统计学意义(P

3、00±500)个]明显高于Ⅱ型胶原酶[(18100±400)个]，差异有统计学意义(P<0．05)。结论消化培养小鼠原代FLSs，建议不打开关节，使用Ⅳ型胶原酶消化，取2—6h消化的细胞悬液进行后续培养。【关键词】成纤维样滑膜细胞；体外培养；细胞鉴定；小鼠【中图分类号】Q343．6【文献标志码】A【文章编号】1008．8199(2014)08-0789-04Influencingfactorsontheprimarycultureofmousefibroblast-likesynoviocytesTANGMei，CHANGShan，

4、CAOZong．rui，LUOXing—yan。HUSong，TANGXin—wei，WANGYan—tang。，，LIUYang，ZOUQiang。(1．DepartmentofImmunology，ZunyiMedicalCollege，Zunyi563003，Guizhou，China；2．DepartmentofOrthope-dics，theFirstAfiliatedHospital，ChengduMedicalCollege，Chengdu610500，Sichuan，China；3．DepartmentofImmun

5、ology，SchoolofBasicMedicalSciences，ChengduMedicalCollege，Chengdu610083，Sichuan，China)[Abstract]objecfiveKnockoutmicearewidelyusedinthestudiesofjointdiseases．Thisarticleinvestigatedtheefectsofjointprocessingmethods，collagenasetypes，andcollagenasedigestiontimeonthenumber

6、ofprimaryfibroblast—likesynoviocytes(FLSs)obtainedfrommice．MethodsThehindlegsof6ofthe12malemicewerecutopenfromthehipjoints，butnotthoseoftheother6．FLSswereisolatedusingthetype．IVcollagenasedigestionmethodandpurifiedbydiferentialdigestion．Cellmorphologywasobservedunderth

7、einvertedmicroscope．Thetype，viability，andpurityofthecellsweredeterminedbyflowcytometry．ResultsSignificantlvfewerFLSswereobtainedfromthemicewiththehindlegscutopen(19133-t-115)thanfromthosewithout(24933±503)(P<0．05)．ThenumbersofFLSscollectedfromthecallsuspensionat1，2，3，4

8、，5，6，and7hoursafterdigestionwere7O0±300．600±100，15200±900，5100±800，2700±300，900±200。and300±100，respectively，thehishes