pca3基因启动子多态性快速分型的dhplc法建立

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1、中华榆验医学杂志2010年4月第33卷第4期ChinJLabMed．Aoril2010，Vo1．33，No．4．临床实验诊断研究．PCA3基因启动子多态性快速分型的DHPLC法建立胡王强孔凡慧张晓霞周武陈兵华胡理怀陶志华【摘要】目的建立DHPLC技术分析PCa特异性PCA3基因启动子多态性的技术平台。方法在PCA3基因启动子区域设计1对引物，以本室先前已经建立的11种(CT6、CT5、C3T5、C：T5／CT6、C3T5／C3T4、C3T5／C4T5、C3T5／C2Ts、C3T5／C2T6、C3T5／ClTs、C2T5／C3r4、C2

2、T6／C2T7)已知多态性的PCA3基因启动子的克隆质粒为标准品，通过优化DHPLC检测体系，建立其多态性克隆质粒的标准图谱。采用完全随机设计，从200例病理确诊为PCa患者中选取147例，对其PCA3基因启动子的扩增产物进行DHPLC分析，比较各标本洗脱峰与标准克隆质粒的DHPLC图谱，以判断临床标本PCA3基因多态性类型，并对这些基因型再行克隆测序予以验证。结果通过克隆质粒优化DHPLC检测体系，最适检测体系为：含44．3％A洗脱液(0．1mol／LrEAA、0．025％ACN)和55．7％B洗脱液(0．1mol／LTEAA、25

3、％ACN)的起始洗脱梯度，含35．3％A洗脱液和64．7％B洗脱液的终止洗脱梯度，柱温53℃，流速：0．9ml／min，在该条件下DHPLC用8种杂合型克隆质粒(C：Ts／CT6、C3T5／C3T4、C3T5／C4T5、C3Ts／C2T5、C3T5／C2T6、C3T5／C1T8、C2T5／C3T4、C2T6／C2T7)进行重复性验证，结果显示，同一多态性色谱峰中2峰的出峰时间之差的批间CV值在0％～6．67％之间。11种克隆质粒多态性标本仅通过1～2次洗脱，就能根据峰型和各峰的出峰时间将其区分开。147例PCa患者中，144例DHPL

4、C检测结果和克隆测序结果一致(Kappa：1，P=0．000)，并出现3种新的峰型，经克隆测序验证为3种新的多态性(C3T5／CT6、C：T／CT、C，T5／CT，)。结论成功建立的DHPLC分析PCA3基因启动子多态性的技术方法，可对PCA3基因启动子多态性进行基因型别鉴定。该方法具快速、准确、经济、高通量、重复性好、自动化等特点，为进一步研究PCa基因多态性提供了技术平台。【关键词】抗原，肿瘤；启动区(遗传学)；多态现象，遗传；色谱法，高压液相；前列腺肿瘤Rapidgenotypingofprostatecancerantigen

5、3genepromoterpolymorphismbydenaturinghigh-performanceliquidchromatographyHUWang—qiang，KONGFan—hui，ZHANGXiao—xia，ZHOUWu，CHENBing-hua，HULi—huai，TAOZhi一^CenterforClinicalLaboratoryDiagnosis，theFirstAffiliatedHospitalofWenzhouMedicalCollege，Wenzhou325000，ChinaCorrespondinga

6、uthor：TA0Zhi—hua．Email：wwwtzh@WZ．cn【Abstract】objectiveToestablishadetectionmethodbasedonDHPLCfordeterminingthepolymorphismsofPCA3genepromoter．MethodsPrimersweredesignedforamplificationofthepromoterofPCA3gene．ThecloningplasmidscontainingC2T6，C2T5，C3T5，C2T5／C2T6，C3T5／C3T4

7、，C3T5／CAT5，C3T5／C2T5，C3T5／C2T6，C3Ts／ClTsC2T5／C3T4andC2T6／C2T7detectedinourpreviousstudy，wereusedDOI：10．3760／ema．j．issn．1009-9158．2010．04．011基金项目：国家自然科学基金资助项目(30872421)作者单位：325000温州医学院附属第一医院实验诊断中心(胡王强、孔凡慧、张晓霞、周武、陈兵华、陶志华)；温州医学院检验医学院生物学实验教学中心(胡理怀)通信作者：陶志华，电子信箱：wwwtzh@WZ．zj

8、．cni““”““。i”’”“””“’”“”’”“”““”””“。”“’”““⋯”⋯”“’“”“”“”“”“”“””‘“”“““i””“”““”“”“’”“”本文直接使用的缩略语：PCA3(prostatecancera