应用fret探针分型技术快速检测羊bmpr-ib基因多态性研究

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1、河北农业大学硕士学位论文应用FRET探针分型技术快速检测羊BMPR--IB基因多态性研究姓名：王红娜申请学位级别：硕士专业：动物遗传育种与繁殖指导教师：张英杰20120520摘要繁殖性状是羊的重要经济性状之一，繁殖性能高低直接关系到羊养殖业生产成本和生产效率，增加羊每胎的产羔数是提高生产效益的重要措施。BMPR-IB基因是绵羊产羔数的主效基因，点突变基因即FecB基因(A746G)可以用于对绵羊多胎品系的选择。本研究的目的是建立一种能够自动化、简便、快速准确、高通量的绵羊BMPR-IB基因分型方法，为绵羊高繁殖力的标记

2、辅助选择和育种提供新的方法技术。选用报道有BMPR-IB基因多态性的小尾寒羊、不含有BMPR-IB基因多态性的道赛特羊及其杂交Fl、F2代羊为材料，建立FRET探针分型技术，应用FRET探针分型技术快速检测羊BMPR-IB基因多态性的方法，对道赛特与小尾寒羊F2代横交固定所产公羊的BMPR-IB基因多态性进行系统检测和统计分析。本试验首先通过PCR-RFLP分型方法找到三种基因型的样本，设计探针以及不同的引物对进行试验，建立FRET探针分型技术，通过测序对两种分型结果进行验证。本试验利用的FRET探针分型方法是一种改进

3、的FRET探针分型技术。采用荧光基团与淬灭基团的组合代替通常利用的两个荧光基团，通过熔解曲线的差异进行基因分型。试验结果如下：1．获得BMPR-IB基因的第6内含子序列，前651个碱基与人的同源性为84％，后面序列同源性较差。2．通过对试验条件的摸索，以及对140份样本的验证，证明利用FRET探针分型技术快速检测绵羊BMPR-IB基因(A746G)多态性的方法准确性达到100％，具有可行性。此方法快速，准确，简便，自动化程度高，分型结果直观、易于在实践中推广和应用于大规模群体的检测。3．在对F2代横交固定所产的158只

4、公羊检测中只有两种基因型，B+基因型频率为0．03，H基因型频率为0．97；对32只横交固定所产双羔羊检测中也只有两种基因型，B+基因型频率为0．22，H基因型频率为0．78。4．随着杂交代数的增加，B基因频率出现明显降低的趋势。关键词：BMPR-IB基因；绵羊；FRET探针分型StudyonRapidDetectionofBMPR-IBGenePolymorphisminSheepbyFRETProbeGenotypingTechnologyAuthor：．WangHongnaTutor：ZHANGY'm西ieMaj

5、or：AnimalGeneticsBreedingandreproductionAbstractReproductivetraitsiSoneoftheimportanteconomictraitsofsheep，thelevelofrepr-oduefiveperformanceisdirectlyrelatedtotheproductioncostsandproductionefficiencyinthesheepindustry，increasingthenumberoflittersizeofsheepisan

6、effectivemeasu·reforimprovingtheproductionefficiency．BMPR-IBgeneisoneofthemajorgeneforfecundityofsheep，poiIltmutations(A746G)calledFecBgeneCanbeusedasthemoleculargeneticmarkerfortheselectionofmultiplebirthsstrainofsheep．11”purposeofthisstudywastoestablishagenety

7、pingmethodwimautomated,simple，rapid，accurate,andhighthroughputforBMPR-IBgenetyping,providinganewmethodandtechniqueformarker-assistedsdectionandbreedingofsheepfecundity．HansheepthatreportedwimBMPR-IBgenepolymorphism，DorsetthatwithoutBMPR-IBgenepolymorphismandtlle

8、irFlhybrid，F2hybridgenerationwereselectedasmaterialforestablishingtheFRETprobegenotypingtechnology,thenBMPR-IBgenepolymorphisminF2×F2ralTlandtwinssheepwererapidlydete