rhg-csf调控分子伴侣介导自噬抑制缺血缺氧诱导神经元损伤的机制研究

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterStudyonneuroprotectionofrhG·CSFbyregulatingchaperone-mediatedautophagyinischemia-inducedneuralmjuryByJingTianSupervisor：Prof．JunfangTengMedicineTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityApril2013学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指

2、导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：＼刁妊日期：2，f岁年岁月；／El学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和

3、汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：＼习硒日期：20杉年s月三7H摘要背景我国逐渐步入老龄化社会，脑血管疾病的发病率日益增加，已成为危害中老年人身体健康的主要疾病之一。脑血管病以高致残率、高死亡率、高复发率的特点，给家庭及社会带来了沉重的负担，同时给患者的身心健康带来了严重的影响。脑卒中分为缺血性卒中和出血性卒中，其中缺血性卒中(cerebralinschernicstroke，CIS)称为脑梗塞(cerebralinfarction，CI)，占到了脑卒

4、中总量的60％．80％。对于脑缺血损伤机制、有效预防措施和治疗药物的研究，一直是广大临床及科研人员的研究重点。目前大量实验表明重组人粒细胞集落刺激因子(recombinanthumangranulonystimulatingfactor，rhG．CSF)，具有脑保护作用。但其机制尚未完全明确，可能与其抗凋亡、动员骨髓干细胞进入脑缺血受损区域分化为神经细胞，促进血管生成，抑制炎症反应，促进神经营养因子释放等作用有关。自噬(Autophagy)RO自我吞噬(self-eating)，此过程可将细胞内某些病毒、病原体及错误折叠而形成的凝聚蛋白或受损的细胞器降解清除。这对于维持机体

5、正常功能具有重要意义。血液系统及心血管系统的研究已证实，重组人粒细胞集落刺激因子(recombinanthumangranulonystimulatingfactor，rhG．CSF)可参与调节自噬，从而在血液细胞分化及减轻心肌缺血损伤中发挥作用。那么分子伴侣介导自噬是否在脑缺血损伤中发挥作用，这是本实验的研究重点。目的已有文献报道rhG—CSF对脑缺血有保护作用，但其作用机制尚未完全明确。本研究将从细胞实验水平及动物实验水平两方面来初步探讨rhG—CSF与分子伴侣介导自噬(chaperone．mediatedautophagy，CMA)的关系，从而进一步明确rhG．CSF

6、的脑缺血保护作用机制，为rhG．CSF的临床应用提供更多的理论依据。方法制备SH．SY5Y细胞缺氧模型，给予不同剂量rhG．CSF孵育。Westernblot检测各组LAMP一2a及HSC一70的表达，细胞免疫荧光检测各组HSC一70表达。将54只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、对照组、实验组，每组18只。采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(middlecerebralarteryocclusion，MCAO)模型。实摘要验组给予rhG-CSF注射5天(50ug／kg·d)，对照组给予等量生理盐水注射5天。使用改良神经功能缺损评分表(modifiedneurologicalse

7、verityscore,mNSS)对三组大鼠进行神经功能评分。Westernblot及免疫组化法分别检测各组LAMP．2a、HSC一70及MAP一2的表达。结果细胞实验结果显示，rhG．CSF可上调细胞缺氧模型中HSC．70及LAMP．2a的表达且呈剂量依赖性，差异有统计学意义(∥o．05)。动物实验结果显示，与假手术组相比，对照组及实验组LAMP一2a、HSC．70表达上调，差异有统计学意义(p<0．05)；与对照组相比，实验组LAMP。2a、HSC．70表达上调，差异有统计学意义(∥0．05)。与假手术组相比，