aβ调控自噬通量的效果及其分子机制研究

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1、学校代码：公开：密级硕士学位论文调控自噬通量的效果及其分子机制研究作者姓名房芳学科专业生物化学与分子生物学指导教师张莹副教授培养院系理学院二零一五年六月力羞又邊乂學硕士学位论文调控自噬通量的效果及其分子机制研究作者：房芳导师：张莹北京交通大学年月学位论文版权使用授权书本孕位论文作者完全了解北京交通大学有关保留、使用学位论文的规定。特授权北京交通大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供杏阅和借阅。同意学校向国家有关部门成机构送交论文的复印件和磁盘。保密的学位论文在解密后适用本授权说

2、明）学位论文作者签名：签字曰期年▲月曰签字曰期：力月‘曰中阁分类宁校代码：：密级：公开北京交通大学硕士学位论文调控自噬通量的效果及其分子机制研究作者姓名：房芳学号：导师姓名：张莹职称：副教授学位类别：理学学位级别：硕士学科专业：生物化学与分子生物学研究方向：生物药物基础和应用北京交通大学年月致谢本论文是在我的导师张莹副教授的悉心指导下完成，张老师真诚待人的处事方式以及严谨的治学态度，深深地感动并激励着我。尤其是在撰写论文时，让我看到了作为导师的学识和对科研的态度。从研究生课题的选题到实验工作的最终完成，从我对实验的陌生到喜欢并开始独立地思考设

3、计实验，这些都离不开张老师悉心的指导和真诚的鼓励。三年来，张老师不仅在科研上细心指导我，在生活中也给予了我无私帮助，像亲人一般关心我的生活和学习，在此向张老师表示由衷的感谢。在本论文的完成过程中，得到了课题组何金生老师、郑妍鹏老师、彭向雷老师、付远辉老师和王荷老师的热心指导与真诚帮助，在此对五位老师表示衷心的感谢！同时，感谢研究院每一位老师在我求学期间给予的指导、鼓励与帮助，在此向各位老师表示真诚的谢意！感谢实验室的各位师兄师姐，尤其是华颖和焦月盈两位师姐，在实验上给予了我很多帮助。同时，还要感谢刘亚茹、李晓丽、魏婷、元小宁、武婷、周晓萌、李

4、玮、严毅飞、周千程、马尧、张耀、蔡超、王鹏坤、李浩、郑青等同学在实验工作以及生活中对我的关心、帮助与陪伴，使我在研究生阶段的工作与生活更加丰富多彩。另外，特别感谢师兄杨海强在我刚进实验室时对我的大力帮助，特别感谢师弟张钊和温杰两位同学在我的实验上给予的无私帮助。特别感谢我的家人，他们的鼓励与支持使我能够在学校专心完成我的学业。最后，向所有关心和帮助过我的人说一声谢谢。感谢国家自然科学基金项目（和、北京市自然科学基金的支持。中文摘要目的：阿尔茨海默病（，是一种老年人中常见的以认知障碍为主要临床表现的神经系统退行性疾病。隐匿起病，发病机制至今仍未

5、阐明。近年来，由于自噬障碍导致的中蛋白质修饰和降解异常成为新的研究热点。在典型病理特征出现之前，患者脑内己经有大量的自噬体存在，提示自噬可能是患者脑内的早期病理反应。本研究旨在筛选和建立稳定表达自哩标志物微管相关蛋白轻链，的细胞系，并用于研究调控细胞自唾通量（的效果，及其对细胞生长的作用和可能的机制。方法：（构建稳定表达的细胞系。本文通过比较细胞转染效率和蛋白表达水平，从种细胞中筛选用于建系的细胞种类。摸索并确定遗传霉素（，的浓度，转染表达质粒，对细胞进行压力选择性筛选。（建立诱导自噬的细胞模型。通过荧光显微镜观察，明确细胞内过量表达以及细胞

6、外多肽处理这两种途径诱导稳定细胞自噬的效果，并进一步探讨剂量、时间以及聚集状态与自唆的关系。用透射电子显微镜（确认自噬体的细胞超微结构特征。（诱导细胞自噬的初步机制。以的、全长肽以及疏水性氨基酸含量不同的种截短形式（、和分别处理稳定细胞，用荧光显微镜观察并计数的荧光斑点数用检测、、及表达量的变化用检测特定诱导细胞自噬过程中伴随的细胞活力的改变情况。结果：（成功构建了稳定表达的细胞系。用的加压筛选周，获得阳性率为的稳定细胞系。成功建立诱导自噬的细胞模型。细胞内过量表达以及细胞外多肽处理这两种途径均可以诱导细胞内出现明显的荧光斑点，并且具有剂量依

7、赖性、时间依赖性以及二级结构依赖性。确定后续实验选用的条件为：聚合的寡聚体以的浓度处理细胞。在细胞超微结构水平，证实了可以诱导自噬体的出现。（诱导自噬的机制研究。首先，荧光显微镜结果显示，不同形式肽均可以诱导细胞自噬激活，并且、和诱导细胞内荧光斑点的效果更明显。诱导自噬的效果与疏水性氨基酸含量无北京交通人学硕士学位论文中文摘要关。其次，结果显示，与对照组相比，组及阳性对照组中均有所增加，的比值伴随细胞自噬增强而增加，提示酯化程度的加强。同时，伴随自噬的激活，蛋白的表达量相应减少，提示自噬促进其降解。经巴弗洛霉素阻断自唆溶酶体形成的环节后，与空

8、白对照组相比，表达水平以及的比值（增加更明显，同时的表达水平未见降低。与处理组相比，组中表达水平、的比值以及表达水平明显增加。同样，与血清去除组相比，血清去除组中表