吗啡调控自噬抑制缺血再灌注损伤的分子机制

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1、中图分类号：R363.2+1论文编号：HBLG2015-0097UDC：密级：公开硕士学位论文吗啡调控自噬抑制缺血/再灌注损伤的分子机制作者姓名：熊瑞媛学科名称：基础医学研究方向：心血管病理生理学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期:2015年4月26日申请学位类别：医学硕士导师姓名：田炜教授单位：华北理工大学基础医学院论文评阅人：刘和亮教授单位：华北理工大学张宇新教授单位：华北理工大学论文答辩日期：2015年6月7日答辩委员会主席：崔慧先教授关键词：自噬；吗啡；mPTP；mTOR；LC3唐山华北理工大学2015年6月TheMechanis

2、mofMorphineInducedCardiaprotectionAgainstIschemia/ReperfusionInjuryviaAutophagyRegulationDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofMedicinebyXiongRuiyuan(BasicMedicine)Supervisor:ProfessorTianWei

3、June,2015独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学

4、校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：√□自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要摘要目的研究表明自噬（Autophagy）在心肌缺血/再灌注（MyocardialIschemiaReperfusion，MI/R）损伤中发挥一定的作用，而吗啡（Morphine，Mor）的心肌保护作用是否与自噬有关尚不明确。本研究探讨吗啡是否通过抑制自噬发挥抗缺血/再灌注损伤心肌保护作用及其具体机制。方法体外培养大鼠心脏组织来源的H

5、9c2细胞，采用650μMH2O2构建心肌细胞氧化应激损伤模型。MTT法检测细胞增殖，激光扫描共聚焦显微镜成像法检测四甲基罗丹明乙酯（tetramethyrhodamineester,TMRE）标记的线粒体膜电位（mitochondrialmembranepotential,∆Ψm）的变化。RealTimeRT-PCR检测Atg5mRNA表达水平的变化，免疫印迹法检测LC3、Beclin1、p-mTOR蛋白水平的改变。结果1采用MTT法检测细胞增殖率，与H2O2（650μM）对照组相比，Mor（0.1µM）处理组吸光度明显增加（114.24±1.

6、64%，P<0.05），证实了Mor具有心肌保护作用。2激光共聚焦结果显示，与H2O2对照组相比，Mor能够明显抑制mPTP的开放（TMRE荧光强度为88.00±2.74%，P<0.05），与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-Methyladenine，3-MA）作用（TMRE荧光强度为88.67±4.50%，P<0.05）相似；与Mor组相比，加入自噬激活剂雷帕霉素（Rapamycin，Rap）后TMRE荧光值显著降低（TMRE荧光强度为59.00±3.79%，P<0.05）。提示Mor可以通过阻止mPTP的开放发挥抗氧化应激损伤作用，这种保护作用

7、可能与Mor抑制自噬有关。3RealTimeRT-PCR结果显示，与空白对照组相比，H2O2能够引起Atg5mRNA表达的明显增高（183.70±10.87%,P<0.05），加入Mor预处理后使H2O2引起的Atg5mRNA的表达增高被抑制（127.20±7.72%,P<0.05），Westernblot结果也证实Mor能够抑制H2O2引起的LC3表达增加（125.91±5.12%,P<0.05）；Westernblot检测自噬正性调控蛋白Beclin1蛋白的表达，各组差异无统计学意义，而检测自噬负性调控蛋白mTOR磷酸化的表达，与空白对照组相

8、比，H2O2能够引起p-mTOR的表达明显降低（78.24±4.20%,P<0.05），加入Mor预处理后使H2O2引起的p-mTOR的