脑缺血再灌注损伤后氧化应激对自噬调控机制的研究硕士论

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1、上海交通大学医学院2008级硕士研究生学位论文脑缺血再灌注损伤后氧化应激对自噬调控机制的研究导师姓名：卞留贯教授研究生姓名：王文静学号：1087209099专业：神经外科学答辩时间：2010年5月上海交通大学医学院2008级硕士研究生学位论文脑缺血再灌注损伤后氧化应激对自噬调控机制的研究导师姓名：卞留贯教授研究生姓名：王文静学号：1087209099专业：神经外科学0究方向：脑缺血再灌注损伤0键词：脑缺血再灌注；自噬；氧化应激；Beclin1；LC3；NAC申请学位级别：硕士0辩时间：2010年5

2、月0养单位：上海交通大学医学院附属瑞金医院基金资助：上海市科委重点课题资助项目（项目编号：09JC1409700;10JC1410700）上海市科委生物医药重点课题资助项目（项目编号：10411954200）上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果

3、由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日 上海交通大学硕士

4、学位论文脑缺血再灌注损伤后氧化应激对自噬调控机制的研究0要目的探讨缺血再灌注损伤后早期自噬激活的作用机制及氧化应激对早期自噬变化的调控，探讨抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine，NAC）和自噬诱导剂雷帕霉素(Rapamycin)在缺血性脑血管疾病方面的应用价值，为缺血性脑血管疾病新的药物治疗提供理论依据。方法采用线栓法制作小鼠短暂性大脑中动脉闭塞(temporarymiddlecerebralarteryocclusion，tMCAO)模型。实验分为假手术组(sh

5、am组)、缺血再灌注组（ischemia/reperfusion，I/R组）。后者随机分tMCAO+生理盐水、tMCAO+rapamycin和tMCAO+NAC。tMCAO+rapamycin组于术前20分钟侧脑室立体定向注射rapamycin，tMCAO+NAC组于脑缺血术后立刻腹腔注射NAC，tMCAO组于脑缺血术后立刻腹腔注射同容积生理盐水。在脑缺血60分钟后，分别再灌注1小时，3小时，6小时，12小时，24小时，Westernblot检测缺血侧皮质和纹状体自噬相关蛋白LC3I、LC3II和

6、Beclin1的表达。利用双氢溴乙啶(Dihydroethidium，DHE)染色检测细胞内ROS水平及对自噬活性的影响，借助荧光显微镜观察NAC或雷帕霉素(Rapamycin)条件下的自噬变化。NAC和Rapamycin分别干预缺血再灌I 上海交通大学硕士学位论文注24小时小鼠，脑片2,3,5-氯化三苯四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazoliumchloride，TTC)染色观察脑梗塞面积。结果与假手术组比较，缺血再灌注损伤后1小时Beclin1开始升高，6小时LC3II/LC3

7、I开始升高。与对照组相比，NAC干预后LC3II/LC3I和Beclin1表达趋势明显升高。DHE染色结果显示缺血再灌注损伤1小时后即开始出现ROS活性增高，经NAC处理后可被部分抑制。TTC染色提示NAC或rapamycin处理后可减小梗塞面积。结论本结果提示小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后自噬表达上调可能是一种保护机制，氧化应激的激活与自噬表达相互影响，抗氧化剂或自噬诱导剂可以通过激活细胞的自噬途径保护神经细胞，减小脑梗塞面积，减轻缺血神经元的损伤。关键词：缺血再灌注损伤，氧化应激，自噬，LC3，

8、Beclin1，NACII 上海交通大学硕士学位论文THEREGULATIONOFOXIDATIVESTREEONAUTOPHAGYAFTERCEREBRALISCHEMIAREPERFUSIONINJURYABSTRACTObjectiveTodiscusstheactivationofautophagyandchangesofearly-phaseautophagyinwhichthemechanismsofreactiveoxygenspecies(ROS)involved.