rhg-csf调控巨自噬参与缺血缺氧后神经元损伤修复的机制研究

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1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMaster(doctor)MechanismofmacroautophagyregulatedbyrhG--CSF‘l-●‘·’LfD··一·involvinglnrePairingwithneuronat-terischemia-hypoxiaByLifangSupervisor：Prof．JunfangTengDepartmentofNeurologyTheFirstAffi

2、liatedHospitalofZhengzhouUniversityApril2013学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：／弱盈日期：力刃；年歹月多／日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留

3、、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：／方二匠一日期：≯97多年歹月弓／日中文摘要rhG—CSF调控巨自噬参与缺血缺氧后神经元损伤修复的机制研究摘要背景和目的：脑血管疾病目前已成

4、为我国致死率、致残率较高的疾病之一，而缺血性疾病占脑血管疾病中的70—80％，因此积极有效的进行临床干预治疗具有重大的社会意义。rhG-CSF(重组人粒细胞集落刺激因子)是一种造血生长因子，具有促进中性粒细胞系造血祖细胞增殖分化的能力。近来国外有越来越多的实验研究证据显示，其在神经组织的修复和功能恢复中发挥着重要作用，如促神经细胞再生、抗神经细胞凋亡、促血管再生、抗炎及免疫调节等。然而rhG．CSF对脑缺血后神经细胞保护的具体机制却尚未清楚，其对巨自噬的影响也鲜见报道。本研究观察了脑缺血后体内及体外神经元LC

5、3II／LC3I比值的变化，探讨了rhG-CSF对巨自噬的调控及其可能的神经保护机制，为临床应用提供理论依据。方法：采取氧糖剥夺(OGD)法制作细胞缺氧模型；Westernblot法检测不同浓度rhG—CSF干预下细胞LC3II／LC3I比值变化，单丹磺酰戊二胺(MDC)法荧光分析巨自噬空泡变化，噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性；应用改良线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型，rhG-CSF干预前后进行改良的神经功能缺损评分(IIlNSS)评定，Westernblot法检测大鼠皮层神经元LC3II／LC3I比值变化

6、，免疫组化法检测LC3蛋白表达变化。结果：rhG．CSF处理后的细胞缺氧模型，低、高剂量组LC3II／LC3I比值较未加药组上调，高剂量组LC3II／LC3I比值较低剂量组上调，显示了随rhG．CSF给药剂量浓度的增加，LC3II／LC3I比值也逐渐增加，差异均具有统计学意义(p

7、意义(p<0．05)；治疗后较治疗前比较，大鼠的神经功能学评分有降低，差异有统计学意义(p

8、细胞增殖活力的作用，且有随剂量浓度增加作用增强的趋势。局灶性脑缺血后rhG．CSF干预可能通过上调巨自噬水平参与神经元的保护。关键词：重组人粒细胞集落刺激因子；巨自噬：缺血缺氧AbstractMechanismofmacroautophagyregulatedbyrhG—CSF。volving。pairingwithneunafter‘schemiainvolvinginrepairingwithn