mrkh综合征的病因分子遗传学研究

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1、MRKH综合征的病因分子遗传学研究学校代码：10023学号：200501020专业年级：北京协和医学院临床医学专业2005级姓名：孙之星导师：朱兰教授北京协和医学院临床学院北京协和医院妇产科联合导师：张学教授北京协和医学院基础学院中国医学科学院基础所医学遗传学系完成日期：2013年6月f㈣目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。1第1章引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．5第2章实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．72．1MRKH综合征家系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯72．2实验试剂⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯72．32．4第3章3．13．2第4章4．14．24．3第5章5．12．2．1工具酶及试剂盒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯72．2．2主要分子生物学试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8分析软件⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8主要仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9基因组DNA的提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．93．1．1一般成员⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯93．1．2三例患者⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一10微阵列比较基因组杂交(arrayCGH)检测染色体结构变异⋯⋯113．2．1实验方法概述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一113．2．2实时荧光定量PCR验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．12全外显子组测序检测基因突变⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．153．3．1全外显子组序列捕获及测序⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．153．3．2数据筛选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一223．3．3候选基因家系内共分离验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一23实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27MRKH综合征家系的临床特征⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯．27ArrayCGH检测染色体结构变异的结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一28全外显子组测序检测致病突变的结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．28讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．35主要新结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．355．1．1本例的遗传模式(常显)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一355．1．2本例未发现DNA拷贝数异常、染色体结构变异⋯⋯⋯⋯．375．1．3得到符合共分离的5个基因⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．385．1．4由本家系结果，探讨不完全外显率的可能原因⋯⋯⋯⋯．．385．1．5由本家系结果，探讨多样化表

5、现度的可能原因⋯⋯⋯⋯．．395．1．6理论价值与实用价值⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．405．2致病性分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．415．2．15个基因分别的结构及功能⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯415．2．2最可能的3个基因⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．485．3展望⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．48第6章小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．49第7章参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。5l综述MRKH综合征的病因学研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．55附录知情同意书样本

6、、伦理审核同意书⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．61个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．65致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．67II中文摘要MRKH综合征(Mayer．Rokitansky．Ktister-Hausersyndrome)指先天性的子宫及阴道上2／3段缺失，也就是人们常说的“石女”。从古代起，不少戏剧作品和笔记小说中就有对“石女”的记载和描绘，可见普通大众和科学家们一样，都对此怀有极为强烈的好奇心。但几百年来“石女”的产生原因一直是一个悬而未决的科学之谜。从目前的研究结果看，大部

7、分“石女”实际上是罹患了一种由未知的遗传缺陷引起，以先天性始基子宫、无阴道为主要表现的遗传病。因此找到导致“石女”发病的遗传学基础，将有助于科学解释这一历史悠久的自然之谜。然而由于本病为罕见病，加之患者不能生育，具有良好研究价值的家系十分罕见，给病因研究带来困难。在传统的微卫星全基因组连锁分析难以奏效的情况下，以往的研究者先是试图采用定位候选克隆的策略，检验了胚胎发育、器官形成、性别分化过程中的一系列关键基因，均未能发现有意义的突变；继而基于全基因组扫描芯片技术，报道少数患者的染色体存在某些微重复区域，但不能确定与本病的发病相