舒洛地特对糖尿病大鼠足细胞podocalyxin、wt1及desmin表达的影响

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1、河北医科大学硕士学位论文舒洛地特对糖尿病大鼠足细胞podocalyxin、WT1及desmin表达的影响姓名：郭红英申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：李英201203中文摘要舒洛地特对糖尿病大鼠足细胞podocalyxin、WTl及desmin表达的影响摘要目的：糖尿病肾病(diabeticnephropathy,DN)的发病率在近几年呈稳步上升趋势。作为ESRD的主要病因之一，DN的预防和治疗越来越受到研究者的重视。在肾小球的三种固有细胞中，足细胞是滤过屏障的重要成分之一，具有特殊的细胞生物学特点和生理功能。足细胞损伤导致蛋白尿发生，而DN以蛋白尿为主要临床特征，说明足细胞的损

2、伤推动DN的发展。Podocalyxin(PCX)是与CD34及endoglycan密切相关的唾液蛋白，表达于肾脏足细胞、造血祖细胞、血管内皮及神经元亚群。PCX在肾脏位于足细胞的顶膜区，所携带的负电荷使相邻的足突分开形成裂孔隔膜(slitdiaphragms，SD)，其抗细胞相互黏附的特性保持了滤过膜的开放。DN的高糖环境可直接抑制PCX的表达，从而使带负电荷的白蛋白更易滤过，另外，PCX表达减少使细胞与细胞之间抗粘附作用降低，进而加快蛋白尿的发展进程。WTl是一种锌指样转录调控因子，对大量的基因表达具有调节作用。研究发现PCX是WTl的直接下游区靶目标，WTl可以结合于PCX基因启

3、动子保守序列，从而具有很强的转录激活力。而WTl本身也是足细胞的特异标志之一，对维持足细胞的正常结构及功能有重要作用。Desmin是慢性肾小球病时足细胞损伤的早期标志物之一。正常情况下，desmin主要位于系膜细胞和血管平滑肌细胞，足细胞中很少，当足细胞损伤时可见表达增强。本课题拟通过链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)诱导建立糖尿病SpragueDawley(SD)大鼠模型，应用舒洛地特及贝那普利干预糖尿病大鼠，通过免疫组织化学、反转录PCR、电镜等方法观察舒洛地特对其足细胞中podocalyxin、WTl及desmin表达水平的变化，探讨舒洛地特是否可以改善糖尿病大鼠

4、足细胞的异常结构及电荷屏障功能障碍，从而降低蛋白尿、延缓肾衰的发生，为人类糖尿病肾病的早期预防及寻找新的治疗策略提供实验性理论依据。中文摘要方法：清洁级健康雄性SD大鼠，体重约180"--2009，共60只，随机抽出12只作为正常对照组(N组)，剩余大鼠腹腔注射STZ(溶于O．1mol／L柠檬酸缓冲液，浓度2％，pH值4．5，注射剂量65mg／kg)方法制备糖尿病大鼠模型，48小时后测定血糖、尿糖，血糖≥16．7mmol／L且尿糖持续阳性确定为糖尿病大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为糖尿病模型组(D组)，贝那普利组(B组)，舒洛地特组(S组)，贝那普利联合舒洛地特组(B+S组)，每组1

5、2只。N组只注射相同体积的柠檬酸缓冲液。B组给予贝那普利10mg·kg。1·dJ灌胃，S组给予舒洛地特10mg·kg．1·d．1灌胃，B+S组给予贝那普利10mg·k91·d．1及舒洛地特10mg·kg以·d．1灌胃，N组与D组给予等量的生理盐水灌胃。整个实验期间大鼠自由饮食，不使用胰岛素及其它降糖药物。分别于造模成功后6、12周收集血、尿及肾组织标本，测定24小时尿蛋白定量、血肌酐及尿素；石蜡切片行免疫组化染色检测肾组织中podocalyxin、desmin表达情况；行RT-PCR检测上述因子mRNA表达水平；行透射电镜观察糖尿病大鼠足细胞形态。结果用均数±标准差(工±s)表示，组间

6、差异性比较采用单因素方差分析，显著性水平等于O．05，应用SPSSl3．0软件包对所有数据进行统计学处理。结果：1．一般情况D组、B组、S组及B+S组大鼠注射STZ后4--一5天即出现多饮、多食、多尿，逐渐消瘦，其中D组症状及体重减轻最明显，而N组则无上述情况出现。2．各组大鼠24小时尿蛋白定量、血肌酐及尿素的比较12周末D组小鼠尿蛋白定量、血肌酐和尿素升高最明显(PO．05)。3．免疫组织化学结果6周和12周末D组、B组、S组及B+S组大鼠肾组织中podocalyxin、desmin表达与N组相

7、比，podocalyxin表达减弱，desmin表达增强，其中12周末差别更为显著(P