阿霉素肾病大鼠足细胞nephrin与podocalyxin蛋白表达与泼尼松干预的实验分析

《阿霉素肾病大鼠足细胞nephrin与podocalyxin蛋白表达与泼尼松干预的实验分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、天津医科大学硕士学位论文．●上．-—L刖吾研究现状、成果小儿肾病综合征(nephroticsyndrome，NS)是一组由多种原因引起的肾小球基底膜通透性增加，导致血浆内大量蛋白质从尿中丢失，临床上以大量蛋白尿、低白蛋白血症、高脂血症和不同程度水肿为四大主要特点的综合征f¨。NS按病因可分为原发性、继发性和先天性三种类型，而原发性肾病综合征(primary-nephroticsyndrome，PNS)约占小儿时期NS总数的90％，是儿童时期常见的肾小球疾病。国外文献报道儿童PNS年发病率约为7～16／10万【2,3】

2、。我国调查资料结果显示，NS约占同期住院泌尿系疾病患儿的21％～31％[训。临床上，大多数NS忠,JL肾脏病理表现为微小病变型(minimalchangedisease，MCD)，其中大于90％自4J患儿对糖皮质激素治疗敏感，然而在弥漫性系膜增生(diffusemesangialproliferation，DMP)、局灶节段性肾小球硬化(focalse。m-nentalglomerulosclerosis，FSGS)患儿中却分别只有50％、30％对激素治疗敏感[引。由此可见，肾病综合征不仅是儿童泌尿系疾病中发病率较高

3、的一种疾病，而且频反复、频复发、激素耐药仍是临床治疗中棘手的19题，但是其病因及发病机制目前尚不十分明确，所以研究小)I,NS的病因及发病机制一直是儿科肾脏病研究者的首要任务。自1998年以来，学者们就已经意识到足细胞分子女[1nephrin、CD2AP、podocin、旺一actinin一4等是NS发生蛋白尿的关键蛋白．之后，随着分子病理、分子生物学等技术的飞速发展与曰益完善，人们又陆续发现了许多由足细胞表达的蛋白分子，即足细胞相关分子，并成为目前研究NS白'9热点之一。尤其最近几年足细胞及足细胞裂孔隔膜相关蛋白在

4、蛋白尿发病机制中的作用备受关注。在正常生理情况下，肾小球滤过屏障具有分子屏障及电荷屏障作用。肾小球滤过屏障分三层，内层为带窗孑i的毛细血管内皮细胞，中层为基底膜(glomerularbasementmembrane，GBM)，外层为上皮细胞足突(footprocess，FP)之间的裂孔隔膜(slitdiaphragm，SD)(见图1)，其中足细胞足突t旬的裂孔隔膜是肾小球滤过屏障中最重要的组成部分【6]。蛋白尿是肾小球滤过屏障受损的标志。已有研究证实I，J，白蛋白滤出的最后屏障是肾小球足细胞足突间SD，所以肾小球滤过

5、屏障中足细胞SD结构和功能的完整性对肾小球的滤过功能的正常维持发天津医科大学硕士学位论文挥着重要的作用。而足细胞是高度分化、增生能力有限的细胞[8]，所以极容易受损，而且受损后很难通过增生来修复，所以研究足细胞损伤及保护机制将会有一定的意义。近年来发现足细胞分子如nephrin、CD2*g关蛋白fCD2APl、podocin、NEPHl矛Dpodocalyxin等参与了蛋白尿的发生与发展【9‘6j，因此本研究期待从足细胞蛋白水平的角度对NS发病机制进行探讨，从而进一步指导临床治疗。Nephrin是足细胞裂孔隔膜上发现

6、的第1种似黏附分子的跨膜蛋白，属于免疫球蛋白超家族。肾脏nephrin足细胞合成，特异性表达于SD，为一跨膜蛋白，由位于染色体19q13．1上的NPHSl基因编码。研究提示nephrin缺陷是发生蛋白尿和足突融合的原因之一[10】。管娜等[11]对25例肾病综合征患儿的检测表明neDhrin的表达量虽无改变，但其分布出现了变化。总之，nephrin分布及表达的异常己被证实与多种先天性及获得性蛋白尿相关，其正常表达对维护足细胞功能结构的完整性及对维持裂孔隔膜结构和功能起着重要作用。PodocNyxin(PCX)是肾小球

7、主要带负电荷的蛋白分子，是组成GBM电荷屏障的主要物质，由肾小球内皮细胞和足细胞合成，在足细胞成熟过程中固定于肾小球足细胞顶膜。Podocatyxin表面电荷具有抗黏附作用，可以防止带负电荷的蛋白分子从裂孔隔膜漏入原尿中。它的减少或化学修饰可以导致滤过屏障的破坏．它对足突的稳定性起着直接的作用。因此，本研究选用足细胞上表达fl勺nephrin及podocalyxin蛋白作为反映NS时足细胞损伤的指标，以期能够更深入的探讨足细胞损伤的机制。阿霉素肾病动物模型具有病理形态学改变与人类肾病综合征类似的特点，所以被广泛应用于

8、人类肾脏病的研究中。阿霉素及其代谢产物可直接损伤足细胞或使足细胞代谢紊乱，造成足细胞的形态学改变、基底膜中阴离子位点的改变，从而使肾小球滤过膜的分子屏障和电荷屏障受损导致蛋白尿的发生[12]。也有文献报道阿霉素及其代谢产物还可能从DNA水平直接干预足突细胞的蛋白合成，使足突细胞结构发生紊乱，造成足突细胞的形态学改变D3]。本研究根据文献【J4J