阿霉素肾病大鼠足细胞nephrin、zo-1、podoplanin的表达变化及舒洛地特对其干预作用的研究

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1、河北医科大学硕士学位论文阿霉素肾病大鼠足细胞nephrin、ZO--1、podoplanin的表达变化及舒洛地特对其干预作用的研究姓名：李娜申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：李英201203中文摘要阿霉素肾病大鼠足细胞nephrin、ZO一1、podoplanin的表达变化及舒洛地特对其干预作用的研究摘要目的：肾病综合征(nephroticsyndrome，NS)是l临床上常见的肾小球疾病之一，其典型表现为大量蛋白尿(>3．5eta)、低白蛋白血症(血浆白蛋白<309／L)、水肿、高脂血症。持续性的大量蛋

2、白尿会造成肾小球高滤过状态，甚至导致肾脏的不可逆损伤，从而严重影响人们的生活质量，给人们带来严重的经济负担和心理负担。因此，如何更好的治疗肾病综合征、缓解蛋白尿是目前临床上学者们密切关注的课题之一。阿霉素肾病(Adriamycinnephropathy,ADN)模型是一种已经被广泛的研究的动物模型，它的临床表现与人类的肾病综合征类似，根据其给药方式和病理表现，可分为急性阿霉素肾病模型和慢性阿霉素肾病模型，第1周到第4周为急性阿霉素肾病模型，病理改变与人的微小病变肾病(Minimalchangedisease，M

3、CD)相似，第5周到第12周为慢性阿霉素肾病模型，病理改变与人的局灶节段性肾小球硬化(Focalsegmentalglomerulosclerosis，FSGS)相似。大量研究表明，产生蛋白尿的主要原因之一是肾小球滤过屏障的变化，特别是足细胞的结构及相关分子的改变，其中足细胞相关分子包括nephrin、ZO．1、podoplanin等。而舒洛地特是一种新型天然糖胺聚糖、类肝素，由猪肠黏膜提取精制。舒洛地特含有低分子肝素和硫酸皮肤素两个主要成分，由于作用原理不同而协同增效。肾病状态时，舒洛地特可以通过保存肾小球的

4、正常负电荷，并抑制细胞的增殖及肾小球滤过屏障的病变，达到降低尿蛋白的排泄率的目的。本课题拟通过尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病大鼠模型，结合透射电镜、免疫组化、逆转录聚合酶链反应(Reversetranscription．polymerasechainreaction，RT-PCR)等检测手段，观察阿霉素肾病大鼠足细胞nepbxin、ZO-1、podoplanin的表达变化，并探讨舒洛地特对其表达的干预作用及作用机制。方法：60只健康清洁级12周龄雄性SD大鼠适应性喂养1周后，随机抽取48只大鼠通过单次尾静脉注射

5、阿霉素(6．5mg／kg)建立阿霉素肾中文摘要病大鼠模型，2周后测量大鼠的24小时尿蛋白定量，如果大于100mg／d则认为是造模成功。造模成功后随机分为阿霉素肾病组(M组)、泼尼松组(P组)、舒洛地特组(S组)、泼尼松+舒洛地特组(P+S组)，将剩余的12只大鼠作为正常对照组(N组)。S组每天给予10mg·kgq．d"1舒洛地特灌胃，P组每天给予7．5mg·kg"l-dJ泼尼松灌胃，P+S组每天给予泼尼松7．5mg·kgq．d"1+舒洛地特10mg·kg-1．d-1灌胃，N组及M组每天以等量生理盐水灌胃，并于应

6、用药物干预后4、8周末测定大鼠24h尿蛋白定量、血白蛋白、血肌酐、血尿素氮、血胆固醇、血甘油三酯，并应用免疫组化、RT-PCR等方法观察阿霉素肾病发展过程中足细胞nephrin、ZO．1、podoplanin的表达变化，于8周末应用透射电镜观察阿霉素肾病大鼠肾脏病理改变。所得结果均用均数4-标准差(x4-8)表示，所有数据应用SPSSl7．0软件包进行统计学处理，组间差异性比较采用单因素方差分析，其中方差不齐时选用Tamhane’S检验，P<0．05被认为有统计学意义。结果：1、实验4周末，M组大鼠24h尿蛋白

7、定量、血胆固醇、血甘油三酯较N组明显增加(PO．05)，而在8周末，M组大鼠的血肌酐、尿素氮较N组有所增加(P

8、较M组有所下降(P