5、胞的活化,在炎症反应中是一种重要的炎症因子。另外,IL-8还具有促进造血细胞增殖及新生血管生成作用,在伤口愈合和肿瘤生长及转移的过程中发挥重要作用。天然来源的IL-8含量极低,难以大批量制备,因而只能利用基因工程技术进行表达和生产[2]。本实验通过PCR获得IL-8的c-DNA,将其连接于原核表达载体pKpL3a(含PL启动子)中,用温度诱导表达技术使外源基因得以表达。1材料与方法1.1材料试剂⑴模板(cDNA文库,CLONTECH公司);大肠杆菌(含pKpL-3a质粒);⑵上游hIL-85ˊ引物(agt gct aaa gaa ctt aga tgtTm=56℃,由Takara公司合成);
6、下游hIL-83ˊ引物(ccg tct aga tta tga att ata agc cct ctTm=56℃,由Takara公司合成);⑶酚-氯仿-异戊醇;NaAc;70%乙醇,无水乙醇;⑷缓冲液A(50mM葡萄糖,10mMEDTA,25mMTris-HCl,pH8.0);碱溶液;乙酸缓冲液;TE缓冲液;RNA酶A溶液;⑸TAE电泳缓冲液;GEBS样本液;溴化乙锭;⑹LA培养基;LA培养皿;100mMCaCl2;⑺包被抗体(抗IL-8单克隆抗体);酶标抗体(酶标记IL-8单克隆抗体);标准品(rHuIL-8,200ng/ml);包被缓冲液(Ph9.60.05MCBS);抗体稀释液(pH7