大肠杆菌表达的重组人bmp论文

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1、大肠杆菌表达的重组人BMP论文王涛，陈苏民，陈南春，赵伟钦，张晓楠【关键词】重组人骨形成蛋白4成熟肽；重组人骨形成蛋白2成熟肽；发酵；蛋白质类/分离和提纯parisonoflargescalepreparationofrebinanthumanBMP4andBMP2maturepeptideexpressedinE.coli【Abstract】AIM:Topreparepurehumanbonemorphogeicproteinmaturepeptide(rhBMP4mandrhBMP2m)inlargescale.METHODS:TherhBMP4mandrhBMP2mengineering

2、strainsentedandinducedforexpressionin15LNBSfermenterrespectivelyandthebacterialcellses.Afterobtainingdatafrompreexperiments,allinclusionbodiesol/LureabufferandloadedonSPSepharoseFFcolumn.RESULTS:Attheendoffermentation,A600nmvaluesofthetoccupied40%ofthetotalbacterialproteinsandrhBMP2maccountedfor82.9

3、%and84.5%ofthetotalproteinsoftheinclusionbodiesrespectively.AfterloadedonSPSepharoseFFcolumn,rhBMP4mandrhBMP2mol/LNaClfractionsandthepurityreached96%and95%entationliquidandtherecoveryrateefermentationprogramandthesimilartechniquestopreparepurerhBMP4mandrhBMP2minlargescale.【Keyanbonemorphogeicprotein

4、4maturepeptide(rhBMP4m);rebinanthumanbonemorphogeicprotein2maturepeptide(rhBMP2m);fermentation;proteins/isolationβpurification【摘要】目的：大规模制备人骨形成蛋白成熟肽（hBMPm）：hBMP4m和hBMP2m.方法：两种工程菌株分别含有能够高表达hBMP4m和hBMP2m的质粒，分别导入15LNBS发酵罐中进行恒溶氧高密度发酵和诱导表达，离心收集菌体,悬浮所收集的菌体，裂菌.freelol/L尿素缓冲液溶解，上SepharoseSPFF阳离子柱.结果：发酵菌液A600

5、nm值分别为28.8和26.3.SOSPAGE电泳后吸光度扫描表明hBMP4m占细菌总蛋白量的40.0%,hBMP2m占细菌总蛋白量的47.2%.洗涤4次后的包涵体中hBMP4m占蛋白量的82.9%,hBMP2m占蛋白量的84.5%.上SepharoseSPFF阳离子柱后，分别收集0.35mol/LNaCl和0.20mol/LNaCl洗脱部分，获得纯度为96%的hBMP4m及纯度为95%的hBMP2m.其收获量分别为1.30g/L发酵液和1.25g/L发酵液；收得率分别为34.33％和34.81％.结论：大规模制备hBMP4m和hBMP2m时，使用相同的发酵程序及相近的纯化方法，都能够得到较好

6、的收得率、较高的收获量和纯度.【关键词】重组人骨形成蛋白4成熟肽；重组人骨形成蛋白2成熟肽；发酵；蛋白质类/分离和提纯0引言骨形成蛋白（bonemorphogeicprotein,BMP）属于转化生长因子TGFβ超家族，是一类多功能的分化因子，构成一个结构和功能相似的家族，由于可以诱导异位成骨而被命名，是骨骼系统正常发育所必不可少的［1］.而近年来的研究表明，BMPs在胚胎发生、神经系统发育及造血系统等方面也具有重要作用和广泛的临床应用前景［2-3］.我们在大肠杆菌系统表达制备出有良好诱导成骨活性的人rhBMP2成熟肽（rhBMP2maturepeptide,rhBMP2m）［4-5］和用大肠

7、杆菌系统表达制备有良好生物学活性的rhBMP4m［6］（国家专利申请号：200410073165.8）的基础上，使用已经构建好的高表达rhBMP4m和rhBMP2m的大肠杆菌工程菌株［4-6］，用已比较成熟的制备rhBMP2m的流程，来比较两者大规模发酵、纯化的效果，旨在为rhBMP4m的大规模生产奠定基础.1材料和方法1.1材料工程菌株DH5α/pDH2BMP4m和DH5α/pDH2BMP2m由