新型egfr抑制剂缓解心肌肥大的研究

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1、万方数据论文题目：新型EGFR抑制剂缓解心肌肥大的研究答辩委员会主席：周墓莲敛授差国韭盍屋垩毯邦太堂答辩委员会成员：挂纽强教授．．暨亩太坐直红昌敛授温趔医料太堂荭堂院呈宣跬副研究员温划医料太堂药坐院万方数据温州医科大学硕士学位论文目录缩词简表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．4前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．7材料方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．14分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．26致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36万方数据温州医科人学硕士学位论文万方数据温州医科大学硕士学位论文新型EGFR

3、抑制剂缓解心肌肥大的研究摘要背景及目的心肌肥大是对生理和病理刺激的多重反应，也是心脏衰竭的一种重要危险因素。肾素．血管紧张素系统在心血管系统中起着很重要的作用，其效应分子AnglI能够诱导心肌肥大。EGFR属于受体酪氨酸激酶家族，广泛应用于肿瘤、创伤愈合和纤维化等增生性疾病研究中。近年来，其在心血管疾病中的作用被人们所认知。本实验的目的检测EGFR抑制剂对AnglI诱导心肌肥大的作用，并探讨其潜在的分子作用机制。方法l、用CaliperMobilityShiftAssay法测定化合物对EGFR酪氨酸激酶活性的抑制率，并用WesternBolt方法检测其对EGF诱导EGFR

4、磷酸化的影响，明确化合物的作用靶点。2、用AnglI刺激心肌细胞(H9c2)建立心肌肥大模型。AngI[刺激H9c224h，通过WesternBolt方法检测MyHC的表达量：AnglI刺激H9c28h荧光定量PCR方法检测肥大基因ANP、BNP、B／Q．MyHC、SKAmRNA水平；AngII刺激H9c248h，免疫荧光方法检测细胞面积；化合物预处理lh，然后检测其对AnglI诱导心肌肥大的作用。Angll分别刺激H9c215和30min，用WesternBolt方法检测EGFR、AKT、ERK磷酸化水平。3、用EGFR的sh．RNA作用H9c2，检测其对AnglI诱导

5、心肌肥大的作用。H9c2转染sh．EGFR质粒48h，再加AngII刺激24h，通过WesternBolt方法检测MyHC的表达量；再加AnglI刺激8h，荧光定量PCR方法检测肥大基因ANP、BNP、B／Ⅱ．MyHC、SKAmRNA水平。Angll分别刺激H9c230min，用WesternBolt方法检测AKT、ERK磷酸化水平。4、用EGF刺激H9c2建立心肌肥大模型。EGF刺激H9c212h，通过WesternBolt方法检测MyHC的表达量；EGF刺激H9c26h荧光定量PCR方法检测肥大基因ANP、BNP、B／Q．MyHC、SKAmRNA水平；EGF刺激H9c

6、236h，免疫荧光方法检测细胞面积；化合物预处理lh，然后检测其对AnglI诱导心肌肥大的缓解作用。Angll分别刺激H9c25和15rain，用WesternBolt方法检测EGFR、AKT、ERK磷酸化水平。5、PP2预孵育H9c2lh，然后用Angll分别刺激H9c25和15min，WesternBolt2万方数据温州医科大学硕上学位论文检测c—Src和EGFR的磷酸化。6、小鼠皮下注射AngII(O．5mg／kg)建立心肌肥大体内模型。30只B57L6小鼠随机分成5组，正常组、模型组、AGl47820mg／kg组、5425mg／kg组和54220mg／kg组。皮下

7、注射AnglI同时灌胃给予AGl478和542，持续2周。处死小鼠前，用超声检测小鼠心脏功能：Masson三色染色和H&E染色检测心脏结构和纤维化程度；免疫组化检测相关蛋白表达量；荧光定量PCR检测肥大基因mRNA水平。结果1、542和543抑制EGFR激酶的IC50值为3．01和8．38nM，且能够显著抑制EGF诱导的EGFR磷酸化(料4p<0．001)。2、AngII明显增加MyHC的表达量，诱导肥大基因mRNA水平升高，扩大细胞面积；AGl478(10gM)作对照，542和543(1、2．5、5、10州)剂量依赖性的抑制