草鱼卵泡抑素(follistatin)重复基因的克隆和功能研究

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1、学校代码：10264研究生学号：M090107273上海海洋大学硕士学位论文草鱼卵泡抑素(Follistatin)重复基因的克隆和功能题目：研究Molecularcloningandfunctionalcharacterizationofduplicatedfollistatingenesingrasscarp英文题目：(Ctenopharyngodonidellus)专业：动物遗传育种与繁殖研究方向：鱼类动物遗传育种姓名：钟莎莎指导教师：邹曙明教授二O一二年五月五日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守

2、学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分

3、内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日草鱼卵泡抑素(Follistatin)重复基因的克隆和功能研究摘要草鱼（Ctenopharyngodonidellus）是我国的四大家鱼之一，在淡水鱼类中有着重要的经济地位。草鱼的个体大，性成熟时间晚，同其他养殖鱼类一样，并未形成较有优势的品系，而传统的育种方式则需要较高的成本和较长的时间。发掘主效基因的功能是进行水产动物遗传

4、育种基础研究的重要内容，从基因型选育优良品种可能是一种有效而快捷的方式。虽然水产动物中应用尚不多，但有一定的应用前景。卵泡抑素(Follistatin,Fst)是一种富含半胱氨酸残基的单链糖基化多肽物质，以旁分泌或者自分泌的方式，结合转化生长因子β(Transforminggrowthfactor-β，TGF-β)超家族成员，包括Myostatin(MSTN)。MSTN是目前发现的对骨骼肌发育和生长起负调控作用的最强抑制物，研究表明Fst能够在MSTN与相应体结合之前阻断其通路，抑制MSTN基因的负性调节，从而恢复肌

5、肉的生长。本文获得了草鱼fst-1/2重复基因cDNA的全长序列，fst-1和fst-2基因全长分别为1341bp和1376bp，开放阅读框分别为969bp和1053bp，分别编码322个和350个氨基酸。与人类和斑马鱼一样，草鱼成熟fst-1和fst-2多肽也包含4个区域：N-domain、DomainI、DomainII和DomainIII，其中N-domain含有6个半胱氨酸基团，DomainI、DomainII和DomainIII三个功能区各含10个。草鱼fst-1和fst-2氨基酸编码区的相似度为78%，草

6、鱼fst-1和fst-2的编码区与人、斑马鱼的相比相似度都达到85%以上。不同胚胎时期RT-PCR分析结果表明，草鱼fst-1和fst-2基因具有不同的表达模式。在正常状态下，草鱼胚胎发育各阶段中fst-1表达量较为恒定，差异不显著；而fst-2直到16hpf时才开始表达,但是从16hpf至40hpf表达量呈逐渐降低的趋势。在成年草鱼中，fst-1在除脾和肠之外的所有组织中均有表达，而fst-2则主要在眼和慢肌中表达。整胚原位杂交结果显示，在草鱼胚胎中fst-1mRNA则在脑、后脑和骨骼肌肌节的外缘处表达，fst-2

7、mRNA则在脑部和骨骼肌表达。进一步通过显微注射过量表达fst-1基因没有对草鱼造成明显的体型变化，而fst-2基因在草鱼胚胎中，体形上有明显的变化，会导致草鱼胚胎的背部向卵黄囊外弯曲，尾巴上翘。进一步采用Tgf2转座子介导了Fsts基因在鲤鱼、草鱼、团头鲂的转基因研究，转基因团头鲂与对照组相比体长增加显著，个体明显大与对照。结果显示说明通Ⅴ上海海洋大学硕士学位论文过增加Fsts蛋白提高动物肌肉产量存在一定可行性。上述研究结果表明，草鱼Fsts重复基因功能即保守而又存在明显差异，它们在草鱼的胚胎发育和成体生长过程中起

8、着重要作用。关键词：草鱼，Fst，序列分析，RT-PCR，显微注射，过量表达，整胚原位杂交Molecularcloningandfunctionalcharacterizationofduplicatedfollistatingenesingrasscarp(Ctenopharyngodonidellus)ABSTRACTGrasscarp(C