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1、第30卷第2期水产科学Vol.30No.22011年2月FISHERIESSCIENCEFeb.2011草鱼PPAR和PPAR基因的克隆与组织表达差异121林亚秋,吉红,郑玉才(1.西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都610041;2.西北农林科技大学动物科技学院水产系,陕西杨凌712100)摘要:根据GenBank上登录的过氧化物酶体增殖物激活受体s(Peroxisomeproliferatoractivatedreceptor,PPARs)基因序列设计2对引物,提取草鱼肝脏组织总RNA,经
2、RTPCR扩增获得了PPAR624bp和PPAR438bp。并利用半定量RTPCR分析了草鱼PPAR和PPAR基因的mRNA组织表达特性,结果在肝胰脏、脂肪、肌肉、肠、脑、性腺、鳔、肝胰脏、心脏、脾脏和鳃均检测到PPAR和PPAR基因的表达,在黏液中未检测到表达。且PPAR在肝胰脏中表达最高,PPAR在脂肪组织中表达最高。关键词:PPAR;PPAR;克隆;组织差异;草鱼中图分类号:Q785文献标识码:A文章编号:10031111(2011)02009404过氧化物酶体增殖物激活受体s
3、(Peroxisome1材料与方法proliferatoractivatedreceptorPPARs)家族属于核受体超家族成员,参与多种代谢过程中的基因表达1.1材料与主要试剂调控[1]。研究表明PPARs在体脂沉积方面具有重试验所用草鱼(体质量约500g)5条购自成都要作用,表现在其具有调控脂代谢相关基因的表市洗面桥市场。取其脂肪、肌肉、肠、脑、黏液、性达,调控脂肪细胞分化等作用[23]。腺、鳔、肝胰脏、心脏、脾脏和鳃11个组织,立即放PPAR受体分为,与3个亚型[4],各亚型入液氮中保存备用。的分布具
4、有组织特异性,发挥的生理功能也不尽相TRIzol总RNA提取试剂盒购自Invitrogen同。PPAR基因主要与脂代谢有关,调节过氧化公司,反转录试剂盒、pMD18T载体、DL2000[5]DNA、TaqDNA聚合酶和JM109感受态细胞购自物酶体的氧化,PPAR主要与脂肪细胞分化、脂代谢、肥胖、糖尿病有关。PPAR的作用目前研大连TAKARA公司;琼脂糖凝胶DNA回收试剂究的较少。目前在鱼类[如斑马鱼(Daniorerio)、盒购自AXYGEN公司;DEPC原液由Sigma分装,黑鲈(Dicentrarch
5、uslabrax)、棕鳟(Salmotrutta其他试剂均为国产分析纯。ffario)和大西洋鲑(Salmosalar)等]关于PPARs1.2方法的研究表明其基本结构、配体特异性等虽与哺乳动1.2.1草鱼PPAR和PPARcDNA片段的克隆[69]取解剖后的草鱼肝胰脏组织,RNA提取参照物相似,但存在差异。但在草鱼(Ctenopharyngodonidella)上未见相关报道。草鱼是我国特有TRIzol说明书进行,利用紫外分光光度计和琼脂糖的淡水性鱼类,属于四大家鱼,具有较高的经济凝胶电泳检测RNA纯
6、度和质量。RT反应取1!g价值。草鱼脂肪组织的过度发育是长期困扰养殖提取的总RNA,按照TaKaRaRNAPCRKit者的问题之一,其原因与脂肪细胞分化,脂质代谢(AMV)Ver.3.0试剂盒推荐的方法以Oligo(dT)紊乱相关。为引物合成cDNA第一链。根据GenBank中已知笔者主要通过克隆得到草鱼PPAR和动物的PPAR氨基酸序列的保守区域设计一对简PPAR基因部分片段,然后利用SQRTPCR检测并引物用于扩增PPAR,根据草鱼的PPAR了2个基因在草鱼各个组织中的表达差异,以期为(EU847421
7、.1)序列设计PPAR引物见表1。研究PPAR和PPAR在草鱼脂肪细胞分化与脂PCR反应体系25!l:灭菌的二蒸水16.375!l、2.5代谢方面的调控作用提供基本参考资料。mmol/LdNTPMix2!l、PCRbuffer(NH)2SO42.5!l、25mmol/LMgCl22!l、cDNA1!l、25收稿日期:20100408;修回日期:20100528.基金项目:国家自然科学基金资助项目(30771667).作者简介:林亚秋(1976-),女,讲师,博士,研究方向:生物技术;Email:li
8、nyaqiu0001@yahoo.com.cn.通讯作者:吉红(1967-),男,副教授,博士,研究方向:水产经济动物营养学与水生生物技术;Email:jihong0405@hotmail.com.第2期林亚秋等:草鱼PPAR和PPAR基因的克隆与组织表达差异95!mol/LPrimer!0.5!l、25!mol/LPrimer∀0.5利
