草鱼基因组enu诱变研究及重复fgfrll、igfbp-5基因的克隆和功能分析

《草鱼基因组enu诱变研究及重复fgfrll、igfbp-5基因的克隆和功能分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、学校代码：10264研究生号：M120107174上海海洋大学硕士学位论文题目：草鱼基因组ENU诱变研究及重复fgfrl1、igfbp-5基因的克隆和功能分析ENU-inducedmutagenesisingrasscarp英文题目：(Ctenopharyngodonidellus)andcloningandfunctionanalysisofduplicatedfgfrl1andigfbp-5genes专业：动物遗传育种与繁殖研究方向：水产动物遗传育种姓名：林思彤指导教师：邹曙明教授二O一五年四月九

2、日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允

3、许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□密文，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日II上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注答辩日期答辩地点III上海海洋大学硕士学位论文草鱼基因组ENU诱变研究及重复fgfrl1、igfbp-5基因的克隆和功能分析摘要草鱼（Ctenopharyngodonidel

4、lus）为我国淡水经济鱼类中产量最大的种类，其性成熟个体较大（＞10kg），性成熟周期较长，目前还没有育成优良品种。传统的育种方式需要较高的成本和较长的时间，草鱼基因组中存在大量未知功能的主效基因，解读它们的功能对认识草鱼生殖、生长、发育及抗逆（病）等经济性状具有重要的理论意义和应用价值。化学诱变已经广泛应用于农作物和蔬菜育种中，由于鱼类体外受精的特点，使其能够在不同时期开展诱变获得突变体。目前，鱼类化学诱变主要采用突变能力强的烷化剂。在模式生物斑马鱼中，ENU诱变能够产生各式突变性状的功能突变体。E

5、NU化学诱变应可用于养殖鱼类的遗传育种，以增加养殖鱼类的基因遗传突变率。本研究以0.1~2.0mmol等不同浓度的ENU溶液处理草鱼受精卵15min，在胚胎体节期的畸形率分别为20.3%~78.5%，胚胎畸形率与ENU浓度成正相关；出苗存活率则从86.3%~17.2%，与ENU浓度成负相关。最后选用0.5mmol浓度ENU溶液处理大量处理受精卵，受精后产生的子代在体节期胚胎畸形率约为50%，约50%的子代形态发育正常，生长速度产生差异，可供筛选出性状优良的突变个+体。通过提取20尾1龄诱变F1子代的基

6、因组DNA，对4个生长发育通路相关基因mstn-1、mstn-2、fst-1、fst-2的部分阅读框进行基因组DNA的PCR扩增和测序。结果显示，ENU能够高效诱导草鱼基因组产生单核苷酸突变，ENU对上述4个基因的平均诱变率为0.13%，表明ENU溶液浸泡受精卵可提高草鱼基因组突变效率，进而应用于草鱼的遗传改良。成纤维细胞生长因子受体类似物1（Fibroblastgrowthfactorreceptorlike1，FGFRL1）是近期发现的FGFRs家族中的一员。FGFRL1是一类缺少细胞内酪氨酸激酶

7、结构域的生长因子受体，研究表明它在细胞增殖、肌肉骨骼系统发育等方面有重要的作用。本研究采用cDNA末端快速扩增法（RACE）克隆了草鱼fgfrl1a/-1b重复基因全长cDNA序列。草鱼fgfrl1a和fgfrl1b基因全长分别为3405bp和2666bp，开放阅读框分别为1461bp和1458bp,可分别编码486个和485个氨基IV上海海洋大学硕士学位论文酸残基。与人类和斑马鱼一样，草鱼成熟Fgfrl1a和-1b多肽也包含三个Ig-like结构域，一个跨膜结构域，两个酪氨酸残基和一个富含组氨酸的细

8、胞内位点。它们都含有6个保守的半胱氨酸残基。草鱼Fgfrl1a和-1b的编码区与斑马鱼的相比相似度分别为96%和91%，与人类FGFRL1的相似性较低（分别为66%和59%），但它们之间的相似度仅为56%。实时荧光定量PCR结果表明，草鱼fgfrl1a和-1b基因都在胚胎发育的受精卵时期有表达，随着体节发育时期而表达量上升，然后呈现下降趋势。在成年草鱼中，fgfrl1a和-1b在所有组织中表达，但组织表达差异较大，fgfrl1amRNA在脑、心脏和肌肉中