草鱼pkz zα基因的克隆及表达纯化

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1、密级：保密★一年NANCHANGUNIVERSITY学士学位论文THESISOFBACHELOR（2007—2011年）题目草鱼PKZZα基因的克隆及表达纯化学院：生命科学与食品工程学院系生物系专业班级：生物工程072班学生姓名：XXX学号：XXXX指导教师：XXX职称：XX起讫日期：-15-南昌大学学士学位论文原创性申明本人郑重申明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明

2、确方式表明。本人完全意识到本申明的法律后果由本人承担。作者签名：日期：学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将本论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密□。（请在以上相应方框内打“√”）作者签名：日期：导师签名：日期：-15-摘要草鱼PKZZα基因的克隆及表达纯化专业：生物工程学号：

3、学生姓名：胡乐华指导教师：范丽华摘要PKR是由干扰素诱导产生的、依赖双链RNA(dsRNA)激活的蛋白激酶，鲫鱼类PKR蛋白是第一个报道的非哺乳类PKR同源物，其鱼类干扰素系统中含Z-DNA结合域故称为PKZ。为了得到草鱼PKZZa基因及PKZ，由于草鱼CiPKZ基因序列与鲫鱼CaPKZ的基因序列具有极高的同源性，本文根据已知的鲫鱼CaPKZ全长cDNA序列，设计引物，经过PCR得到了草鱼PKZ基因，在将目的基因连接到pET-32a载体，导入大肠杆菌，原核表达、纯化后得到PKZ。由于在酸性条件下，考马斯亮蓝G-250和蛋白质结合产生

4、特殊的蓝色，最大吸收波长在595nm处。最后通过考马斯亮蓝法测定该蛋白质的浓度为0.97mg/ml。关键词：PKZ；鱼类干扰素；引物设计；PCR；草鱼；原核表达；考马斯亮法；Za-15-AbstractAbstractPKRisandsRNA-dependentproteinkinasethatisinducedbyinterferontreatment.AfishPKR-likegene,namedCaPKR-like,wasthefirstidentifiedfishgenemostsimilartomammalianPKRs.

5、TheinterferonsystemoffishcontainingZ-DNAbindingdomainisknownasthePKZ.BecausethesequenceofgrasscarpCiPKZgeneandthegenesequenceofcruciancarpCaPKZgeneishighlyhomologous.Accordingtotheknownfull-lengthcDNAsequencesofcarpCaPKZ.Primers,AfterPCR,thegrasscarpPKZgenes,Inthetarge

6、tgeneconnectedtothepET-32avector,IntoE.Coli,Expression,purificationbyPKZ.Astheacidicconditions,BradfordG-250andproteincombinetoproduceaspecialblue,Themaximumabsorptionwavelengthat595nm,Finally,theBradfordmethodofproteinconcentrationof0.97mg/ml.Keywords:PKZ;Fishinterfer

7、on;Primerdesign;PCR;Grasscarp;Prokaryoticexpression;Bradford;Za-15-目录目录摘要ⅠAbstractⅡ第一章文献综述11.1PKZ简介11.2PKZ的结构特征41.3PKZ的激活机制121.4Za131.5草鱼简介191.6PCR221.7IPTG的诱导作用241.8本论文的研究目的和意义24第二章材料和方法312.1实验材料312.1.1主要仪器和设备242.1.2主要试剂242.1.3实验材料242.2实验方法322.2.1草鱼PKZZαcDNA的克隆242.2.1

8、原核表达PKZZα第三章实验结果31结论136参考文献（References）138致谢150-15-第一章文献综述第一章文献综述1.1PKZ简介PKR是由干扰素诱导产生的、依赖双链RNA(dsRNA)激活的蛋白激酶，属丝氨酸-苏氨酸