bkt和crtrb基因植物表达载体的构建与其在花生和玉米中的遗传转化

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1、摘要虾青素是一种抗氧化活性极强的类胡萝h素，具有广泛的应用价值。B一胡萝h素酮化酶(BKT)和B．胡萝h素羟化酶(C舡R．B)是虾青素生物合成途径中的两个关键酶。花生是世界上主要的油料作物和经济作物，其体内不合成虾青素。但存在虾青紊合成的前体物质B．胡萝h素。故本研究采用基因工程技术手段，将这两个基因导入花生，为实现利用转基因花生生产大量虾青素提供实验和理论指导。以￡口缸口DNA聚合酶用PCR的方法分别从p董墨28a(+M柑、pET-28a(+一，坍中扩增得到6h和c隙坷基因，将这两个基因构建入载体pGulBlAl301。形成带有抗性基因的双价植物表达载体口CAl

2、佃IAl301批．c棚。通过冻融法将这双价载体转入农杆菌硪A105．形成工程菌株EHAl05／DCAMB认1301南妇，水。以花育23和花育24两个花生品种为受体．分别选用预培养4d的胚小叶及胚生长点作为侵染外植体，经工程菌Ⅲ执105倒：舢衄IAl301击胁c，tR侵染后再生芽，通过Km筛选获得46株抗性植株，PCR检测初步证实她。和c棚Ⅻ基因已经转化到花生基因组中。玉米是重要的粮食作物和饲料作物，其中含有大量的玉米黄素，却未见虾青素的生成。B一胡萝h素酮化酶(BKT)可以将玉米黄素催化形成虾青素，因此通过植物基因工程方法将该酶基因转入玉米中，从而提高虾青素含量，

3、改善玉米品质具有重要意义。利用三口妇口DNA聚合酶以PCR的方法从pET-28a(+№缸中扩增得到h船基因，用h打基因替换pBl221中的觯s基因形成含有caMV35S启动子和N0s终止子的6打基因表达盒．然后插入植物表达载体p(啪队1301的多克隆位点．最终获得带有目的基因、选择标记和G№报告基因的植物表达载体pC啪n1301批。以冻融法将该载体转入农杆菌IBA4404，形成工程菌株LBA4H404，pcm皿认1301批。以玉米自交系齐319预培养1d的胚性愈伤组织为转化受体，经工程菌侵染后通过Hyg筛选获得抗性愈伤。经Gus组织化学染色分析表明Gus报告基因已

4、经转入玉米胚性愈伤组织，进一步采用PCR扩增的方法对目的基因进行验证，结果表明抗性愈伤的基因组中含有6缸基因。资料检索结果表明，到目前为止尚未有将b时和cr承基因导入花生和玉米的报道。关键词：花生，玉米，B一胡萝}素酮化酶基因，B一胡萝h素羟化酶基因，载体构建，农杆菌，遗传转化，虾青素AbstractAstax锄thinwitIlbj911antio，ddaIltactivityisofgmatapplicationvaluc．BKTandcKIR·Bare憎okeybios”mesisenzymes0f勰taxantllinwhichencodedby五幻gen

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