lea基因改造和载体构建及旱稻遗传转化

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1、ClassifiedIndex：Q943．2UDc：580SecrecyRate：PublicUniversityCode：10082HebeiUniversityofScienceandTechnologyDissertationfortheMasterDegreeTheModificationofLEAGeneVectorConstructionandtheTransformationofUplandRiceCandidate：Supervisor：AssociateSupervisor：AcademicDegreeApppfiedfor：Speciality：ZhaiHui

2、qingPro￡WeiJingfangMasterofScienceBotanyEmployer：SchoolofBiologicalSciencemadDateofOralExamination：EngineeringMay,2014河北科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：翟会韵⋯燧名辎萝∥≯年妒

3、衫日哗妇?铜河北科技大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权河北科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。口保密，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于Ⅶ床保密。(请在以上方框内打“寸’)⋯一虢狂幺锄矽f忙妒≯6日，指导教师签名∥晦岁月7钿摘要水稻是全球主要粮食作物，旱稻，又叫做陆稻，性耐旱，是适合在旱地种植的栽培稻，是水稻的变异型。采用生物技术分离抗旱基因，并通过转基因

4、方法培育旱稻抗逆新品种，是提高作物产量的有效途径，本课题以早稻成熟种子为外植体，利用农杆菌转化的方法，将抗逆基因LEA转入植物基因组中，从而获得转基因抗逆性早稻新品种。为了使三尉基因在植物体内更高效的表达，将脚掰基因构建到pCAMBIA3301中，在多克隆位点插入泛素启动子，并且用Bar基因做为筛选标记基因。将构建好的表达载体pCAMBIA3301一LEA质粒转入农杆菌么妙J中，用农杆菌转化法将目的片段导入早稻中。将已得到的转基因早稻植株进行DNA水平的鉴定。对的得到的转基因旱稻的种子进行DNA提取，设计目的基因LEA引物，进行PCR扩增，初步筛选已将LEA基因整合到旱稻基因组中

5、阳性植株，待到T3代种子时，可通过Tail．PCR技术来确定目的基因的插入位点，通过RT-PCR鉴定目的基因在基因组中是否表达，确定稳定遗传的早稻的新品系。关键词早稻；抗逆性；三尉基因；PCR；载体构建河北科技大学硕士学位论文IIAbstract№ce峪themalnfoodcropsintheworld．Dryrice，alsoknownasuplalldrice，isanotherkindofricewhichisacultivatedrice咖ewithastrongdroughtresistaIncea11dablIitytoendurebarren·Separation

6、ofdroughtresistancegenebybiologicaltech010黜andthroughtransgenicmethodstocultivatene、vvarietiesofuplandfiee．TiffsisaIleI-lectlvewaytomcreasecropyield．Byusingthemethodofagrobacteri岫．mediatedtrallstf0珊atlon，thisresearchhastakentheripeseedsofuplandriceastheeXplaI如．GettingthereVerSegenetic—LEAgene

7、transformintotheplantgenome，SoaStoobtaillthetransgenicresistanceofnewuplandricevarieties．InordertomaketheexpressionofLEAgeneintheplantsmoree蚯cienLwebuilt三EAgeneIntothepCAMBIA3301，thaninserttheubiquitinpromoteratthemuRipleclomngsite,withusingt