白桦4cl基因表达载体的构建及遗传转化

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1、万方数据学校代码：10225学号：S14548学位论文白桦4CL基因表达载体的构建及遗传转化指导教师姓名：申请学位级别：论文提交日期：授予学位单位：孔雪刘雪梅教授硕士2014年4月东北林业大学学科专业：遗传学论文答辩日期：2014年6月授予学位日期：2014年6月答辩委员会主席：论文评阅人：聋必栉素大学万方数据UniversityCode：10225RegisterCode：S14548J

2、UlIIIIlUlIIIIIIIIIIIIIIII[11lY2722955DissertationfortheDegreeofMasterTheconstructionofexpressionvectora

3、ndgenetictransformationof4--coumarate：CoAligaseinBetulaplatyphyllaSuk．Candidate：Supervisor：AssociateSupervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speciality：一●Dateof0raIExamination：University：KongXueLiuXuemeiMasterGeneticsJune，2014NortheastForestry万方数据摘要木质素是植物体内含量十分丰富的大分子有机物质，在植物体中的含量仅次于纤维素，参与植物次生细胞壁的形成，是维管植物

4、生长发育过程中所必须的，在植物进化过程中是一个十分重要的因素。4一香豆酸辅酶A连接酶(4．eoumarate：CoAligase，4CL)作为苯丙烷代谢过程中的关键酶，参与木质素、植物抗毒素以及类黄酮等物质的合成。木质素合成途径中，4CL基因起到木质素前体物质与各分支反应相联系的纽带作用，能够催化p．香豆酸、芥子酸、咖啡酸和阿魏酸生成与其相对应的CoA酯llJ。本研究以白桦的eDNA为材料，根据前期获得的4CLeDNA全长基因，构建了植物过表达载体pROKll．4CLl、pROKII一4CL2、pROKII一4CL3以及反义表达载体pROKII-anti4CLl，并且采用了农杆菌介导的遗传转化

5、法获得了Bpl4CLI过表达阳性植株。通过ⅣP71口特异引物以及Bpl4CLI基因特异引物进行PCR检测，均有特异性条带产生。通过qRT．PCR的结果分析了Bpi4CLl基因在转基因株系中的表达量均明显高于对照株系，表明了Bpl4CLl基因已经整合到白桦的基因组中，并且在RNA水平得到了表达。实验中共得到4个卡那霉素抗性芽，经检测发现其中有3个为转基因株系，共得到转基因植株35株，卡纳抗件芽的阳性效率在75％左右。此外，还优化了白桦遗传转化的程序。最佳的转化程序为：预培养3天，共培养3天，侵染时间5分钟，筛选时卡那霉素的最佳浓度为40mg／L，而最佳脱菌浓度为羧卞青霉素500mg／L。关键词白

6、桦；4CL：载体构建：遗传转化万方数据AbsttactAbstractLigninisakindofmacromolecularorganicmatter淅也veryrichcontentinplants，whichissecondonlytothatofcellulose．ItiSinvolvedintheformationofplantssecondarycellwall，necessaryinvascularplantsgrowthanddevelopmentandaveryimportantfactorinplantsevolutionaryprocess．4-coumaricacid

7、coenzymeAligase(4一coumarate：CoAligase，4CL)participateinthesynthesisoflignin，plantantitokinandflavonoids，etc，asakeyenzymeinphenylpropanesmetabolicprocesses．Inligninbiosynthesis，4CLgeneplayalinkingroleintheassociationbetweenligninprecursorsandeachbranchreaction，itiscapabletocatalyzethep-coumaricacid、e

8、rucicacid、caffeicacidandferulicacidtogeneratetheircorrespondingCoAeSter．ThisstudyusedtheeDNAofBetulaplatyphyllaasmaterial，constructedplantsover-expressionvectorspROKII一4CLl、pROKII·4CL2、pROKII一4CL3anda