硕士论文-含有antiwaxy基因表达载体的构建及水稻遗传转化

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1、致谢首先感谢导师李建粤副教授在研究生三年中给我的悉心帮助!本论文是在导师李建粤副教授的悉心指导下完成的。论文从选题到制定具体的试验方案，从实施到撰写，每一步都凝结着李老师的心血。感谢李老师三年来在学业上的悉心指导!李老师严谨的治学态度、兢兢业业的工作作风和对科学孜孜不倦的钻研精神，将使我铭记和受益终生，是我毕生所学习的目标。不仅如此，李建粤老师在生活上还给予了我最悉心的照料，谨此致以虔诚的敬意和衷，心的感谢!衷心感谢中科院植物生理研究所与生态研究所洪孟民研究员和王宗阳研究员为我们提供的质粒，感谢上海闵行区农科所陆文龙高级农艺师为我们提供试

2、验的水稻材料，感谢遗传学硕士点周根余教授和杨仲南教授在学习和生活上的关怀以及在论文实验上给予的支持和帮助!感谢实验室所有的同学，张伟、刘丽娜、魏秀丽、李海泉、逯慧、尹中明、顾婷玉、石少华、周永国、沈忠伟，他们都在实验上给了我无私的帮助!感谢2002级本科生戎益泉、张善明、魏振、陈文杰同学在论文和试验中给予的帮助!感谢好友钱志萍、庞婉婷、杨云云在生活上给予我的关心和帮助，也给了我很多快乐!最后，感谢我的家人对我三年研究生学习生涯的支持，他们的理解、鼓励，关怀与宽容是我不断前进的动力!再次衷心的感谢所有关心和帮助过我的老师、同学和朋友们!含有

3、础一嬲哮基因表速栽体构建反水稻遗传转化摘要在大量转基因植物被推向市场的同时，人们对转基因植物可能存在的风险感到担扰。在转基因作物中，不含标记基因和外源启动子将提高转基因作物的食用安全性和对环境的安全性，更易被广大消费者所接受，也有利于对同一个植物品种进行多次转基因操作。本研究在p13w8载体的基础上重新构建了含有反义蜡质基因，且去除了抗性标记基因(潮霉素基因)和35s启动子的安全性表达载体p13AwY_1，这可为日后利用基因工程的共转化法培育优质食味品质安全转基因水稻奠定基础，更有利于消费者食用安全和生态环境的可持续发展。本研究还利用根癌

4、农杆菌介导的共转化法，将含有pcAMBIAl301双元载体(含有潮霉素抗性基因、秽s报告基因)和己成功构建的p13AWVl双元载体(只含反义蜡质基因不含抗性标记基因和譬淞报告基因)的根癌农杆菌以1：9的比例混合导入由粳型光敏核不育系水稻261S成熟胚诱导形成的愈伤组织中，经抗性筛选获得41棵转基因植株。转基因To代植株经PCR检测，有10棵为共转化植株，共转化率为24．39％。southemblot杂交分析证实，p13AwY_l双元载体T．DNA已整合进入转基因植株基因组中。利用pc触佃．IAl301双元载体上的gw报告基因从Tt代种子中

5、淘汰具有报告基因及抗性标记基因的转基因后代，这为筛选只含目的基因、无抗性选择标记基因和报告基因的转基因后代奠定基础。当今世界上正兴起一种新型稻米——软米育种。软米最大特点是：稻米的直链淀粉含量较低，一般小于10％，其米质介于粘性与糯性之间，口感极佳。目前已有报道表明，导入蜡质基因(腑哕)的反义片段能够有效降低稻米的直链淀粉含量，但其转基因后代中直链淀粉含量小于10％或明显降低的后代都比较少。因此，本研究又在安全性表达载体p13Awvl的基础上构建含有双份反义蜡质基因的安全性表达载体p13AWV2，即把双份反义蜡质基因片段构建在一个1’-D

6、NA区段上。该表达载体的成功构建可为培育直链淀粉含量明显降低的特种水稻奠定基础。关键词：转基因作物安全性反义蜡质基因表达载体构建无标记基因共转化根癌农杆菌介导35S启动子软米食味品质改良搐要AbstractWithlargeamountoftrallsgenicplamsbeingcommercialized，peoplefeeluneasyaboutthepotemialrisksoftranSgenicplantsMarker-行eeandacceptorpromotermayraisefoodandenvimnmembiosafet

7、yofGeneticallyM0dmedCrops．Thus，consumercanreceivethemmoreeasilyReconstmctionOfp13AWY二1isbasedonp13W8．p13AWY-lcamesanti-腑叫genebutwithoutresistancemarkergene(hygromycin)and35Spromotefnwilllayt11efoundatiOnforriceeatingqualityimproVemembytransgenictechnologyMoreoveL“canmaket

8、hegeneticallymodifiedplamssaf．erforconsumersandtheenvironmem．Thetwol(indsof彳g阳6鲫ff鲫zf踟咖抬鸺whichre