白桦雄花序发育差异表达基因分析及rab基因植物表达载体构建

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1、万方数据学校代码：10225学号：S14551学位论文白桦雄花序发育差异表达基因分析及Rab基因植物表达载体构建指导教师姓名：申请学位级别：论文提交日期：授予学位单位：暴帅刘雪梅教授硕士2014年4月东北林业大学学科专业：遗传学论文答辩日期：2014年6月授予学位日期：2014年6月答辩委员会主席：论文评阅人：聋必杉素犬学万方数据UniversityCode：10225RegisterCode：$14551㈣DissertationfortheDegreeofMasterBetulaplatyphyllaof

2、themaleinflorescencedevelopmentaldifferencesingeneexpressionanalysisandconstructionofplantexpressionvectorCandidate：Supervisor：AssociateSupervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speciality：Dateof0raIExamination：University：ofRabBaoShuaiLiuXuemeiMasterGeneticsJune，

3、2014NortheastForestry万方数据摘要白桦雄花发育周期较长，从出现雄花序至花粉成熟经历近一年，其发育早期和中期是决定雄配子体发育的重要时期。本文采用cDNA．AFLP方法对早期和中期发育雄花序进行了差异表达谱分析，共得到了62个TDFs，其中30个TDFs与Genbank中的基因具有较高的同源性，其它32个是未知序列。GO分析结果显示，这些已知基因主要参与代谢过程、细胞过程、刺激应答、生殖、信号传导和生物调控等生物学过程，其分子功能主要涉及催化活性、结合分子功能、酶调节活性和转运活性等。我们也

4、发现了参与生殖和雄花发育的两个重要TDFs，8ptbs658和Bplbsl99。另外，我们选择11个TDFs进行不同组织的qRT-PCR转录表达分析，结果表明这些基因不仅参与花发育，也参与营养组织的发育，但各自具有不同的组织表达特征。此外，我们又通过RT-PCR分离了白桦Rab基因得cDNA，通过RACE技术扩增到其全长序列，该序列全长1017bp，全长序列的开放阅读框长度为612bp，共编码203个氨基酸，命名为BplRab。将全长序列翻译成为氨基酸序列，对Rab基因的蛋白结构做了预测，进行了多序列比对，发

5、现该基因的氨基酸序列和其它种植物的氨基酸序列相似性高达90％以上。结构域分析发现Rab蛋白具有Rab家族的保守的G结构域，然后预测了Rab蛋白的三维结构。最后构建了植物表达载体pROKII．Rab，为以后研究白桦Rab基因功能、农杆菌介导的遗传转化及侵染拟南芥和白桦植株奠定了良好的基础。关键词白桦；花发育；差异表达；Rab；转录表达万方数据AbstractBetulaplatyphyllamaledevelopmentcycleislonger,it’Snearlyayearfromtheemergenceo

6、fmaleinflorescencetopollenmaturation，itsearlyandmiddevelopmentaretheimportantperiodstodeterminethemalegametophytedevelopment．Inthispaper,eDNA-AFLPmoleculartechniquewasusedforsequencedifferenceexpressionspectrumanalysesofearlyandmid．termdevelopmentmale，recei

7、ved62TDFstotally，30TDFsofthemhavehighhomologywiththegenesinGenbank．theotherswitIllowhomologyareunknownsequences．TheresultsofGOanalysisillustratedthattheseknowngenesaremainlyinvolvedinmetabolismprocess，cellularprocess，stimulateresponse，reproduction，signaltra

8、nsductionandbiologicalcontrolbiologicalprocesses，theirmolecularfunctionsaremainlyrelatedtocatalyticactivity，functionofcombinationwithmolecular,enzymeregulatoractivityandthetransferactivity,etc．Wealsofo