茄子smmsra基因vigs表达载体的构建及表达分析

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1、园艺学报，2015，42(8)：1495–1504.ActaHorticulturaeSinicadoi：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0177；http：//www.ahs.ac.cn1495茄子SmMsrA基因VIGS表达载体的构建及表达分析*赵祯，刘富中，张映，齐东霞，陈钰辉，连勇（中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京100081）摘要：利用RT-PCR从茄子单性结实品系D-10中获得甲硫氨酸亚砜还原酶A基因（SmMsrA）的编码区。通过Gateway同源重组技术，构建了3个分别含SmMsrA基因不同片段的烟草脆裂病毒（Tob

2、accorattlevirus，TRV）介导的基因沉默（VIGS）表达载体pTRV2-SmMsrAi。表达载体转入农杆菌GV3101后，用注射压迫法侵染茄子叶片。采用表型观察、TRV病毒分子检测和qRT-PCR技术，评价构建的VIGS体系对SmMsrA基因的沉默效果。结果表明，报告基因PDS沉默后叶片呈现明显的光漂白现象，SmMsrA基因沉默后叶片呈花叶状，果实变小，叶片和果实中的SmMsrA基因的表达量明显降低，表明SmMsrA基因是正向调控茄子果实发育的相关基因。关键词：茄子；SmMsrA基因；VIGS；Gateway技术；果实发育中图分类号：S641.1文

3、献标志码：A文章编号：0513-353X（2015）08-01495-10VIGSExpressionVectorConstructionandExpressionAnalysesofSmMsrAGeneinEggplant*ZHAOZhen，LIUFu-zhong，ZHANGYing，QIDong-xia，CHENYu-hui，andLIANYong（InstituteofVegetablesandFlowers，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing100081，China）Abstract：Thecodin

4、gsequenceofmethioninesulfoxidereductaseA（SmMsrA）wasamplifiedfromeggplant（SolanummelongenaL.）parthenocarpiclineD-10usingreversetranscriptionpolymerasechainreaction（RT-PCR）method.ThroughtheGatewayrecombinationtechnology，threeTRV（Tobaccorattlevirus）-mediatedVIGSexpressionvectorswerecons

5、tructed，pTRV2-SmMsrAi，containingdifferentfragmentsofSmMsrAgene.TheVIGSexpressionvectorsweretransformedintoAgrobacteriumstrainGV3101，andtheninoculatedeggplantleavesbyAgro-syringe.Phenotypesobservation，TRVmoleculardetectionandqRT-PCRthechnologywereusedtoobserveandevaluatetheVIGSsystemf

6、orsilencingtheSmMsrAgeneeffection.TheresultsshowedthatthepositivecontrolofsilencingreportergenePDSshowedphoto-bleachingphenotypeineggplantleaves；SilencingSmMsrAgenewereobservedpaleyellow（mosaic）leavesandboresmallerfruits；TheexpressionofSmMsrAgenewasdecreasedobviouslyintheleavesandfru

7、itsoftheinfectedeggplantplants.Theseresultssuggestedthatthe收稿日期：2015–03–09；修回日期：2015–06–11基金项目：国家‘863’计划项目（2012AA100202）；中国农业科学院科技创新工程项目（CAAS-ASTIP-IVFCAAS）；科技部国际合作项目（2011DFR31180）；农业部园艺作物生物学与种质创制重点实验室项目*通信作者Authorforcorrespondence（E-mail：lfzcaas@126.com）ZhaoZhen，LiuFu-zhong，ZhangYin

8、g，QiDong-xia