凋亡抑素启动子调控trail基因表达在宫颈癌治疗中应用的研究

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1、独铷。陛离嚷Y丑，86722秉承学校严谨的学风与优良的科学道德，本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所、知，除了文巾特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他八已经发表或撰写过昀研究成果，不包含本人或他人已申请学位或其他用途使用过的成果。与捷一同工作的同志对本研究所做的{壬j可贡献均已在论文中作了明确的说明}f表示了致谢。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承翅一切相关责任。论文作者签名：i塾蕴日期：2塑』!』!丛／嚣护罐谖产秘声骥本八完全了解第四军嚣大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在校受读学位期闻论文工

2、作的知识产权单位属第四军医大学。本人保证毕业离交后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位仍然为第四军医大学。学交可以公布论文的全部或部分内容(含电子版，保密内容除，})，可以采丑影印，缩印或其他复制手段保存论文。学校有权允许论文被查阋和惜日，并在校园网上提供论文内容的浏览和下载服务。论文作者签名导师签名j鲤坠日期：竺I：盟!第四军医大学硕士学位论文凋亡抑素启动子调控TRAIL基因表达在宫颈癌治疗中应用研究硕士研究生：高萍导师：杨继庆教授辅导教师：漆家学副教授第四军医大学生物医学工程系，西安710032中文摘要肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(n泌IL)，是

3、1996年继TNF—a，Fas之后新发现的一种能诱导细胞凋亡的TNF超家族成员，为II型跨膜蛋白，全长为281个氨基酸，由胞浆区(14aa)、跨膜区(26aa)和胞膜外区(241aa)组成；胞膜外区有蛋白酶作用位点，可以被从膜上剪切下来，形成可溶性分子。TRAIL在多种组织和细胞中广泛表达并有五种受体：死亡受体DR4，DR5，诱骗受体Dc褂，DcR2及OPG，其受体表达和分布特性表明它与TNF及Fas有不同的诱导凋亡机制，由于它可以诱导多种肿瘤细胞、病毒感染细胞凋亡，而对正常细胞基本无影响，故被认为是一个极具潜力的凋亡诱导因子。但也有研究表明。TRAI

4、L也对部分人正常细胞敏感，例如人肝细胞。为此。我们利用凋亡抑素(s11rvivin)启动子调控IL．2信号肽引导的TRAILcDNA功能区表达、诱导肿瘤细胞凋亡。该方法的应用将Trail表达限定在肿瘤细胞内，从而最大限度地降低TRAIL对正常组织细胞的损害。目的：构建凋亡抑素(survivin)启动子调控1L-2信号肽与TRAIL融合基因真核表达载体，探讨其在宫颈癌特异性、靶向性诱导凋亡的作用。方法：(1)刹用已获得的带有TRAILcDNA片断的表达质粒pRNDE2，1和IL一2信号肽基因序列，扩增IL．2信号肽和TRAIL的融合基因，克隆入第四军医太

5、学硕土芋傅羹墓爵攀鎏塑蠢冀诵羹錾篓蓁蓁￡蚕买莪薹奏羹荤翼饕薹薹羹囊谩冀羹霪蠹漓守蓥豇刳j爨黟型嚣；邈蠹鋈确翮翮期鲋Ua魅鞠朔业婪鞠墅耋嚣鲤萋羹眷聪嚣离磊翻咏；毫鲥l￥≈≈

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8、ofceUsandiIlducetumorcellsapoptosis．Thmoroccu嬲lceisdirecuyrelatedt0genech明ges，so岫ortllefapysmdiesint11e1evelofgenecaIlbIingtobumaIlbeingsnewhopes．InlproVememofefficiencyaIldspeci丘c时isalwaysemphaSisedongenether印yhlordertoacllieVetumor印ecifictarget，t11especificpromotersareoRenused

9、tocon缸olnle也erapeuticgeneeXprcssionbyregulationof订aIlscription．Wbmakeuseofexpressioncarcinomadiffbrenceofsurvivinpromoterther印yactivitybetweencenricalcaflcercellsandnomalcells，regulatea11dcontrolⅡleexpressionof印optoticgenebysurviVillpromoter，achievespecmcalregulationandcont∞loft

10、raInscriptionalleVelintumorcellstoavoidharmness