条件启动子pCTR4在隐球菌基因表达调控中的应用.pdf

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1、生旦真菌堂杂蠢2014年2月第9卷第1期ChinJMycol，February2014，Vol9，No．1·论著·条件启动子pCTR4在隐球菌基因表达调控中的应用赵静宇法振宗方伟孟云芳张超周兆婧潘炜华廖万清(上海长征医院皮肤病与真菌病研究所全军真菌病重点实验室第二军医大学附属长征医院皮肤科，上海200003)【摘要】目的通过条件启动子pCTR4的质粒构建以及其在新生隐球菌中的同源置换，研究其在隐球菌基因表达调控中的应用。方法应用套叠PCR，构建含报告基因NEO的铜离子抑制性启动子质粒pNEO／CTR4和启动子同源重组框，并利用基因枪将其转化入新生隐球菌感受态细胞，常规及实时

2、定量PCR检测条件启动子对目的基因的转录调控效应。结果成功构建了质粒pNEO／CTR和隐球菌条件启动子重建菌株，条件启动子pCTR4对目的基因具有预期的转录诱导和抑制效果。结论新建铜离子抑制性启动子质粒pNEO／CTR4可以应用于对隐球菌目的基因表达水平的调控；隐球菌泛素编码基因UBI并非致死性关键基因。我们的研究为今后新生隐球菌泛素系统的分子致病机制研究奠定了基础。【关键词】新生隐球菌；条件启动子；泛素；致病机制【中图分类号】R379．5【文献标识码】A【文章编号】1673．3827(2014)09-0001-06Applicationofconditionalpromo

3、terpCTR4inCryptococcalgeneexpressionregulationZHAOJing—yu，FAZhen—zong，FANGWei，MENGYun—fang，ZHANGChao，ZHOUZhao-jing，PANWei—hua，LIAOWan—qing(Instituteofdermatologyandfungaldisease，KeyLaboratoryofthearmyfungaldisease，Departmentofdermatology，ChangzhengHospital，Shanghai200003)【Abstract】Objectiv

4、eToexploretheapplicationofconditionalpromoterpCTR4inCryptococcalgeneexpressionregulationviaconstructionofnewvectorpNEO／CTR4andpromoterreplacement．MethodsConstructedthenewplasmidpNEO／CTR4fusingre—portgeneNEOandcopper—repressivepromoterpCTR4viaoverlapPCR．Onthebasis，constructeditspromoterrepl

5、acementcassette，andthentransformedthemintoCryptococcalcompetentcellsviageneguntogetitsreconstitutionstrains，whichweretestedviaregu—larandreal-timePCR．ResultsCorrectnewvectorpNEO／CTR4andCryptococcalreconstitutionstrainswereobtainedandcon—firmed．ConditionalpromoterpCTR4playedinducedorrepress

6、edeffectinUBItranscriptionunderdifferentmediaasexpected．ConclusionThenewvectorofcopper—repressedpromoterwasapplicableinregulatingCryptococcalgeneexpression．Andtheubiq—uitinencodinggeneUB1JwasnotessentialforviabilityinCryptococcusneoformans．Ourstudylaidthegroundworkforfollowingfunctionalstu

7、diesofubiquitinsysteminCryptococcusneoformans．【Keywords】Cryptococcusneoformans；conditionalpromoter；ubiquitin；pathogenesis[ChinJMycol，2014，9(1)：1-6]新生隐球菌(Cryptococcusneoformans)是临1000000例新发病例，对人民健康造成了极大的床上最常见的侵袭性真菌感染病原菌之一，可感危害。染免疫功能抑制和免疫功能正常的宿主，主要引随着隐球菌多个致病菌株的全