宫颈癌组织中抑癌基因syk启动子甲基化的研究

《宫颈癌组织中抑癌基因syk启动子甲基化的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、宫颈癌组织中抑癌基因Syk启动子甲基化的研究：孙桂霞赵淑萍马德花陈荣辉【摘要】目的探讨宫颈癌组织中脾酪氨酸激酶(Syk)基因启动子甲基化程度及其临床意义。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测60例宫颈癌、50例宫颈上皮内瘤变(CIN)和20例正常宫颈组织中Syk基因启动子甲基化情况。结果宫颈癌组织中Syk基因启动子甲基化率明显高于CIN组织及正常宫颈组织(χ2=17.13、19.71，P<0.05);Syk基因甲基化程度在宫颈癌组织中的表达与肿瘤淋巴结转移有明显相关性(χ2=10.22,P<0.01)，但与病人年龄、肿瘤大小、

2、临床分期、组织学类型及病理类型无明显相关性(P>0.05)。结论Syk基因启动子甲基化可能与宫颈癌发生及其淋巴转移有关。【关键词】宫颈肿瘤;脾酪氨酸激酶;DNA甲基化[ABSTRACT]ObjectiveToexplorethemethylationofspleentyrosinekinaseSykgenepromoteranditsclinicalsignificanceincervicalcancer.MethodsUsingmethylationspecificPCRtechnique,specimensfrom60cervical

3、cancerpatients,50cervicalintraepithelialneoplasia(CIN)patients,and20normalcervicaltissueethylationofSykpromoter.ResultsThemethylationrateofSykgeneincervicalcancertissuealcervicaltissue(χ2=17.13，19.71;P<0.05).ThemethylationofSykgeneinthecancertissuearkedlycorrelatedphnodeme

4、tastasis(χ2=10.22,P<0.01),butnotassociatedor,clinicalstage,typesofhistologyandpathology(P>0.05).ConclusionMethylationofSykgenepromotermaybecorrelatedphnodemetastasisofcancerofthecervix.　　[KEYSP)方法检测宫颈癌组织中Syk基因启动子甲基化状态，以探讨Syk启动子甲基化在宫颈癌发生发展中作用及意义。　　1材料和方法　　1.1标本　　选取2005年8

5、月～2007年8月在我院妇科行宫颈癌根治性切除的60例宫颈癌标本。病人年龄22～70岁,平均43岁。按照FIGO(2000年)分期：ⅠA2期10例,ⅠB1期20例，ⅠB2期15例，ⅡA期15例;术后病理证实有淋巴结转移者23例，无淋巴结转移者37例;病理分级：G1者17例,G2者29例,G3者14例;病理类型：鳞癌38例,腺癌22例;肿瘤直径≤4.0cm者30例，>4.0cm者30例。另选取20例因子宫肌瘤行全子宫切除术病人的正常宫颈组织和50例行宫颈锥切手术或活检的宫颈上皮内瘤变(CIN)组织作为对照,其中CINⅠ者18例，CINⅡ～Ⅲ者

6、32例,病人年龄23～67岁,平均42岁。取得的标本迅速置液氮保存备用。所有病人术前或活检前未接受放疗或化疗，临床资料完整。　　1.2主要试剂　　DNA提取试剂盒购自上海华舜试剂公司;甲基化修饰及纯化试剂盒购自美国EPIGENTEK公司。　　1.3方法　　1.3.1组织DNA的提取及准备按DNA提取试剂盒使用说明提取组织DNA，测定波长260nm处吸光度值与波长280nm处吸光度比值，确定DNA浓度和纯度。DNA甲基化修饰严格按照试剂盒说明进行。　　1.3.2MSP方法修饰的DNA应用PCR试剂盒进行巢式双重PCR,按照使用说明进行操作。首轮PC

7、R的引物为:5′GATTAAGATATATTTTAGGGAATATG3′(sense),5′CACCTATATTTTATTCACATAATTTC3′(antisense),扩增片断长为600bp[2]。PCR反应条件为:反应体积为20μL;首先94℃预变性5min,然后94℃30s,57℃30s,72℃30s,35个循环;最后72℃延伸10min。取第一轮PCR产物1.0μL进行第2轮双重PCR。甲基化特异性引物为:5′CGATTTCGCGGGTTTCGTTC3′(sense),5′AAAACGAACGCAACGCGAAAC

8、3′(antisense),扩增片段长为243bp,包含9个CpG岛。非甲基特异性引物为:5′ATTTTGTGGGTTTTGTTT