宫颈癌组织中抑癌基因syk启动子甲基化的研究论文

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1、宫颈癌组织中抑癌基因Syk启动子甲基化的研究论文孙桂霞赵淑萍马德花陈荣辉【摘要】目的探讨宫颈癌组织中脾酪氨酸激酶(Syk)基因启动子甲基化程度及其临床意义。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测60例宫颈癌、50例宫颈上皮内瘤变(CIN)和20例正常宫颈组织中Syk基因启动子甲基化情况。结果宫颈癌组织中Syk基因启动子甲基化率明显高于CIN组织及正常宫颈组织(χ2=17.13、19.71，P0.05);Syk基因甲基化程度在宫颈癌组织中的表达与肿瘤淋巴结转移有明显相关性(χ2=10.22,P0.01)，但与病人年龄、肿

2、瘤大小、临床分期、组织学类型及病理类型无明显相关性(P0.05)。结论Syk基因启动子甲基化可能与宫颈癌发生及其淋巴转移有关。【关键词】宫颈肿瘤;脾酪氨酸激酶;DNA甲基化ABSTRACTObjectiveToexplorethemethylationofspleentyrosinekinaseSykgenepromoteranditsclinicalsignificanceincervicalcancer.MethodsUsingmethylationspecificPCRtechnique,specimensfrom6

3、0cervicalcancerpatients,50cervicalintraepithelialneoplasia(CIN)patients,and20normalcervicaltissueethylationofSykpromoter.ResultsThemethylationrateofSykgeneincervicalcancertissuealcervicaltissue(χ2=17.13，19.71;P0.05).ThemethylationofSykgeneinthecancertissuearkedlyco

4、rrelatedphnodemetastasis(χ2=10.22,P0.01),butnotassociatedor,clinicalstage,typesofhistologyandpathology(P0.05).ConclusionMethylationofSykgenepromotermaybecorrelatedphnodemetastasisofcancerofthecervix.KEYSP)方法检测宫颈癌组织中Syk基因启动子甲基化状态.freel者30例，4.0cm者30例。另选取20例因子宫肌瘤行全子宫切

5、除术病人的正常宫颈组织和50例行宫颈锥切手术或活检的宫颈上皮内瘤变(CIN)组织作为对照,其中CINⅠ者18例，CINⅡ～Ⅲ者32例,病人年龄23～67岁,平均42岁。取得的标本迅速置液氮保存备用。所有病人术前或活检前未接受放疗或化疗，临床资料完整。1.2主要试剂DNA提取试剂盒购自上海华舜试剂公司;甲基化修饰及纯化试剂盒购自美国EPIGENTEK公司。1.3方法1.3.1组织DNA的提取及准备按DNA提取试剂盒使用说明提取组织DNA，测定波长260nm处吸光度值与波长280nm处吸光度比值，确定DNA浓度和纯度。DNA甲基

6、化修饰严格按照试剂盒说明进行。1.3.2MSP方法修饰的DNA应用PCR试剂盒进行巢式双重PCR,按照使用说明进行操作。首轮PCR的引物为:5′GATTAAGATATATTTTAGGGAATATG3′(sense),5′CACCTATATTTTATTCACATAATTTC3′(antisense),扩增片断长为600bp2。PCR反应条件为:反应体积为20μL;首先94℃预变性5min,然后94℃30s,57℃30s,72℃30s,35个循环;最后72℃延伸10min。取第一轮PCR产物1.0μL进行第2轮双重P

7、CR。甲基化特异性引物为:5′CGATTTCGCGGGTTTCGTTC3′(sense),5′AAAACGAACGCAACGCGAAAC3′(antisense),扩增片段长为243bp,包含9个CpG岛。非甲基特异性引物为:5′ATTTTGTGGGTTTTGTTTGGTG3′(sense),5′ACTTCCTAACACACCCAAAC3′(antisense)，扩增片段长为140bp,包含8个CpG岛。甲基化和非甲基化的引物置于同一个反应中进行扩增,反应条件除甲基化和非甲基化的退火温度为59℃30s，2

8、5个循环外,其他均与首轮PCR条件相同。第2轮PCR产物2.0～5.0μL经过20g/L的琼脂糖电泳、溴化乙锭染色后,在凝胶成像系统下观察成像结果。双重PCR产物中,若出现长243bp产物则为Syk基因存在甲基化;若出现长140bp产物,则认为该基因存在非甲基化。1.4统计学分析采用PPM