宫颈癌抑癌基因PTEN启动子区甲基化状态的研究.pdf

《宫颈癌抑癌基因PTEN启动子区甲基化状态的研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、宫颈癌抑癌基因PTEN启动子区甲基化状态的研究摘要PTEN(磷酸酶和张力蛋白同源物)是一种具有双蛋白质和脂质磷酸酶活性的肿瘤抑制基因。CpG岛甲基化是导致抑癌基因失活的一种机制，近年来许多学者从PTEN基因启动子区甲基化方向着手研究PTEN基因在肿瘤组织中下调的机制。然而关于宫颈癌组织中PTEN基因启动子区的甲基化状态存在争议，因此宫颈癌组织中PTEN基因启动子区甲基化状态及甲基化对PTEN基因表达的影响有待进一步研究。目的探讨宫颈癌细胞系及宫颈组织中PTEN基因启动子甲基化状态以及对其表达的影响方法选取体外培养的4种宫颈癌细胞系HeLa，C

2、aski，C．33A，HT-3以及18例宫颈癌组织和8例宫颈正常组织作为研究对象，采用BSP联合TA克隆测序检测PTEN基因启动子甲基化状态；采用去甲基化药物5．氮杂．27．脱氧胞苷(5．Aza-dC)处理体外培养的4种宫颈癌细胞系，应用实时荧光定量PCR检测药物处理前后PTEN基因表达差异。结果1．4种宫颈癌细胞系PTEN基因启动子区呈低甲基化状态，HPV阳性细胞系(HeLa，Caski)与HPV阴性细胞系(C-33A，HT-3)PTEN基因启动子甲基化率无显著性差异(CpGl：t=2．83，P=0．11：CpG2．-t-=1．00，P=0

3、．42)；2．宫颈癌组织以及正常宫颈组织中PTEN基因启动子区均呈低甲基化状态，且两者间PTEN基因启动子甲基化水平无明显差异(CpGl：T=83．50，P=0．15：CpG2．T=34．5，P----O．720)；3．Real-timeqPCR显示，4种宫颈癌细胞系5-Aza-dC处理前后PTEN基因mRNA表达无明显差异(HeLa：仁．1118，P=0．36；Caski：t=-2．07，P=0．18；C．33A：仁．0．07，P=0．95：HT-3：户一0．53，P=0．65)。结论1．BSP联合TA克隆测序结果分析结果显示宫颈癌细胞系中

4、HPV感染与PTEN基因启动子区甲基化程度无明显相关性；2．BSP联合TA克隆测序结果比较及统计学分析提示宫颈癌组织中PTEN基因启动子区甲基化不是导致该基因表达下调的主要原因：3．抑癌基因启动子高度甲基化被认为是除突变和缺失以外抑癌基因功能失活的关键机制，但仅应用MSP定性分析抑癌基因的甲基化水平具有一定的局限性，抑癌基因启动子区域甲基化研究中同时采用BSP联合TA克隆测序可更为客观的反映其甲基化状态。硕士研究生杨晨曦(妇产科)指导导师王言奎教授关键词：PTEN；宫颈癌；甲基化；5-氮杂-27．脱氧胞苷(5-Aza—dC)AFurtherR

5、esearchandAnalysisofHypermethylationatthePTENCpGIslandinCervicalCancerCellLinesandCervicalTissuesAbstractP删(Phosphataseandtensinhomologue)isatumorsuppressorgenewithdualproteinandlipidphosphataseactivity．AsisknowntoallthatCpGislandhypermethylationofgenepromoterisanotherroute

6、totumoursuppressorgeneinactivation．recently,manyscholarsmadeseriousofstudiesonthemechanismofPTENgenedownregulatedthrowdirectionofpromotermethylation．however，theliteratureregardingprimerhypermethylationofPTENincervicalcanceriscontroversial．Therefore，primermehtylationanddownr

7、egulatedmaybecausedbyprimermethylationincervicalcancerofPTENneedafartherresearch．objectiveToinvestigatemethylationstatusatPTENgenepromoterandinfluencemaybecausedbywhichonPTENexpressionincervicalcancercelllinesandcervicaltissues．MethodsMethylationstatusof2PTENgeneCpGislandsw

8、ereinvestigatedinfourkindsofcervicalcancereelllinesHeLa，Caski，C-33A，HT-3，18casesof