宫颈癌细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性及其表面TRAIL受体表达的研究

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1、原创性声明本人郑羲声明：所呈交豹学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任壹本人承担。论文作者签名：蕉鉴日期：边丛：生：￡殳关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可数将本学位论文的全部或部分

2、内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：槛导师签名：堡塑空日期：》迈：竺，!里山东大学硕士学位论文宫颈癌细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性及其表面TRAIL受体表达的研究专业：妇产科学研究生：李慧荣导师：朱琳中文摘要【目的】：通过检测宫颈癌细胞Hela表面删L死亡受体(DR4、DR5)及诱骗受体(DeRl、DeR2)的表达差异，观察Hela细胞系对TRAIL蛋白诱导凋亡敏感程度，分析细胞系表面DR4、DR5与DcR

3、l、DeR2表达的相对程度与TRAIL诱导凋亡敏感性间的差异。探讨TRAIL参与富颈癌细胞凋亡的程度，为临床治疗宫颈癌提供实验依据。【方法】：富颈癌细胞株Hela的培养采用RPMI-1640培养基+10％灭活小牛血清。(1)Hela细胞以每孔2x104个细胞的浓度接种于96孔板，不同终浓度(10,20,loo,200Ug'L。)的TRAIL蛋白加入至Hela细胞，继续培养24h后，各孔加入10皿MTT(终浓度为O．59·L-1)孵育4h．弃掉培养基，各孔加入100皿二甲亚砜，充分混匀，酶标仪检测490r

4、im波长下各孔吸光值(A)。(2)从Hela细胞中提取RNA，然后进行逆转录一聚合酶链(RT-PCR)反应。取扩增产物在2％琼脂糖凝胶上电泳，EB染色，紫外光下观察结果并照相保存，软件分析结果．(3)细胞沉淀溶于200vaPBS，不同管中分别加入小鼠抗人DR4，DR5，DcRl，DcR．2的单克隆抗体各Ip．L，4"C孵育30rain，冷PBS洗涤两次．细胞沉山东大学硕士学位论文淀重悬于含有FITC标记的兔抗鼠二抗的PBS溶液中，4"C孵育30min，冷PBS洗涤两次．最后将细胞沉淀溶于lmlPBS溶液

5、中，上样流式细胞仪，检测样品平均荧光强度。【结果】：宫颈癌细胞Hela对TRAIL诱导的细胞凋亡反应有较高的敏感性，在较低浓度(100ng／m1)TRAIL作用下，即可有接近50％的细胞杀伤率。Hela细胞表面DR4、DR5受体mR．NA的表达明显高于DcRl、DcR2受体，有显著性差异(PO．01)。FCM结果显示Hela细胞表面DcRI，DcR2受体蛋白的表达水平明显较DR4，DR5受体低，分别是DcRl17．7

6、％、DcR25．3％、DR499．9％、DR597．8％。’【结论】：通过培养人宫颈癌细胞Hela，应用MTT法检测n认IL蛋白对宫颈癌细胞Hela的诱导凋亡率，表明Hela细胞对TRAIL诱导的细胞凋亡反应有较高的敏感性。然后进行RT-PCR反应，分析电泳结果，从而检测出宫颈癌细胞表面TRAIL受体DR4、DR5、DcRl、DcR2mRNA的表达水平；进行流式细胞技术，从而检测出宫颈癌细胞表面TRAII，受体DR4、DR5、DcRl、DcR2蛋白的表达水平．Hela细胞表面诱骗受体的表达水平明显较死亡

7、受体低，诱骗受体之间及死亡受体之间表达无差别。说明富颈癌细胞由于缺乏DCRl和DCR2的保护而易被TRAIL诱导细胞凋亡，预示着TRAIL在宫颈癌的治疗中具有良好的前景。【关键词】：宫颈癌细胞；肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体；死亡受体；诱骗受体2山东大学硕士学位论文THESTUDYOFTHESENSITIVITYOFCERVICALCARCINOMACELLTOWARDSTRAILANDTHEEXPRESSIONPATTERNOFTRAⅡ。RECEPTORSSpecialty：GynecologyandO

8、bstetricsPostgraduate：LiHui—rongABSTRACT[Objective]：TostudytheroleofTRAILinthetreatmentofcervicalcarcinoma,weanalyzedthesensitivityofcervicalcarcinomaceUtoTRAILldllingintheenntextoftheexpressionofdifferentTRAILreceptors，an