rna干扰技术抑制igf1r表达诱导肺癌细胞及肿瘤对ddp增敏作用

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1、缩略词(A一T)(Abbreviations)缩略语英文全称中文注释Bpbasepairs碱基对BSAbovineserumalbumin牛血清白蛋白caspase。ysteinylaspartae一speei五eproteas天冬氨酸特异性半肤氨酸蛋白e侧Acomp一ement娜deoxynueleicacid互补脱氧核糖核酸DDP顺铂DEPCdiethylPyroearbonate焦碳酸二乙酷DMSOdimethylsulfoxide二甲基亚矾DNAdeox卿eleieacid脱氧核糖核酸州TPSdeoxyribonueleosidet找phosphate脱氧核普三磷酸D

2、sRNAdoublestrandedRNA双链RNAEBethidiumbromid溟乙锭Eeolieseheriehiacoli大肠杆菌EDTAdisodiumethylenediaminetetra一acctate乙二胺四乙酸二钠IoFinsulin一likegro毗几etor胰岛素样生长因子IGF一IRtype1insulin一likegowthfactorreeeptor胰岛素样生长因子l型受体M一MLVmolonymurineleukemiavirusreversetranseriptase鼠白血病病毒逆转录酶MMT3一(4，5一dimethylthiazol一2一

3、yl)一2，s一diphemyltetra一zoliumBromid四甲基偶氮哇盐mRNAmessengerribomielei。aeid信使核糖核酸NseLenon一small。elllung。ancer非小细胞肺癌NF一妞nudearfactor-kaPpaB核转录因子oD。Pticaldensity光密度pAGEpolyae巧lamidegeleleetrophares聚丙烯酞胺凝胶电泳PBSphosphatebufferedsaline磷酸缓冲盐溶液pCRpol卿eraseehainreaetion聚合酶链反应RNA一dePendentRNAPolymerase依赖R

4、NA的RNA聚合酶RNAinierferenceRNA干扰rotatePerminute每分钟转速reversetranseriPtion一Polymeraseehainreaetion逆转录聚合酶链反应SDSsodiumdodeeylsulfate十二烷基硫酸钠siRNAshorthairpinRNA短发夹状RNAsiRNAsmallinterferingRNA小干扰RNATaqthermus一aquatieusDNAPolymerase耐热DNA聚合酶TEMEDN，N，N，，N，一tetramethylEthylenediamineN，N，N，，N忆四甲基乙二胺TGF一p

5、transforminggrowthfactor一p转化因子pTristrishydroxymethylaminomethane三轻甲基氨基甲烷了RNA干扰技术抑制IGFIR表达诱导肺癌细胞及肿瘤对DDP的增敏作用研究生:程海峰导师:陈如坤摘要目的:评价RNA干扰(RNAinte成rence，RNAI)技术对人肺癌A549细胞系中胰岛素样生长因子1类受体(IGFIR)表达的阻断效应，以及IGFIR基因沉默后肿瘤在细胞水平和动物水平对化疗药物敏感性的改变及其机制。方法:应用u6启动子介导DNA模板转录生成短发夹样RNA(siRNA)并转染人肺癌A549细胞株，经Rl’-PCR和

6、Westemblot检测IGFIR表达的改变;联合应用化疗药物顺铂(DDP)，通过MTT法，流式细胞技术观察细胞生长，细胞周期，细胞凋亡及DDP半数致死量(工CS。)的变化;建立荷瘤裸鼠肺癌模型，腹腔注射DDP，观察沉默工GFIR表达对裸鼠体内肿瘤生长情况的影响，并应用Tl」NEL法检测瘤内细胞凋亡情况;进一步分析IGFIR信号通路中Erk和A火t磷酸化程度，探索其可能的作用机制。结果:成功构建靶向IGF一IR的51胭A表达载体和对照组表达载体，分别命名为pIGFIR一siRNAI、pIGFIR一siRNAZ和peontrol一siRNA。pIGFIR一siRNAI和PIGF

7、IR一siRNAZ转染组IGFIRmRNA表达量分别是对照组的(20.1士3.4)%和(77.8士3.9)%，蛋白表达量分别是对照组的(9.2士2.1)%和(44.9士4.1)%，组间具有显著性差异勿<0.05)。沉默IGFIR表达同步伴随E双和Akt磷酸化受抑。抑制IGFIR表达使DDP对肿瘤细胞24h、48h、72h的ICS。均明显减少，IGF1R-siRNAI组DDP作用72h的IC*为0.92mg/L，明显低于eontrol·s1RNA组的3.77mg/L，0.5mg/LDDP联合IGFIR一s