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1、川芎嗪对依托泊苷诱导小细胞肺癌细胞凋亡增敏作用的评判作者：崔丽娟张会军阎蕴力阴梅云郑力芬【关键词】四甲基吡嗪;,,依托泊苷;,,脱噬作用;,,流式细胞术,,,, 摘要：目的：观察低浓度(10μg/ml)的中药钙拮抗剂川芎提取物川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)与化疗药物依托泊苷(etoposide,VP16)合用对人小细胞肺癌(smallcelllungcancer,SCLC)细胞的影响。方法：用MTT法观察药物对体外培养的人小细胞肺癌H446细胞存活率的影响;用吖啶橙/溴乙啶双荧光染色法检测凋亡细胞，采用流式细胞术分析药物对H446细胞周期的影响。结果：TMP和VP
2、16合用与单用VP16相比细胞存活率明显下降,VP16的浓度在0.1、1、10、100μg/ml时,细胞存活率分别为(93.85±2.51)%、(91.90±2.10)%、(66.64±3.73)%和(8.21±1.84)%。VP16与低浓度的TMP联用后,上述浓度细胞存活率分别降为(90.80±1.20)%、(78.96±1.94)%、(51.48±2.52)%和(2.56±1.44)%,其合并指数为0.85,增效倍数为4.32。双荧光染色法证实TMP可增强VP16的凋亡诱导作用;细胞周期分析表明低浓度TMP对细胞周期无明显影响,VP16半数抑制浓度使细胞生长停滞在S期,抑制细胞有丝分裂及
3、DNA合成,两者合用主要表现为VP16的作用。结论：低浓度的TMP与VP16合用可增加对小细胞肺癌细胞的诱导凋亡作用。 关键词：四甲基吡嗪;依托泊苷;脱噬作用;流式细胞术 川芎嗪是中药川芎的有效成分之一，又称四甲基吡嗪，属酰胺类生物碱，该制剂主要应用于心脑血管疾病等［1］。近年来 细胞凋亡指数（%）=VA+NVAVAN+NVNA+VA+NVA×100% 共计数3遍，结果取平均值。实验表明TMP能够增强VP16的凋亡诱导作用，见表2。 表2药物作用24小时后各组的凋亡率（略） 注：*与VP16组比较，P<0.05。 24TMP及VP16对H446细胞周期的影响 47.78
4、μg/ml（IC50）的VP16作用于H446细胞后，S期的细胞显著增加，G2/M为0，说明细胞阻滞在S期阻断了有丝分裂，抑制细胞生长。该浓度的VP16加用TMP后，H446细胞周期的分布与单用VP16差异无显著性(P>0.05)；联合用药组及VP16组与对照组比较，增殖指数均下降，见表3。 表3药物作用24小时后对各组细胞周期及增殖指数的影响（略） 注：*与对照组比较，P>0.05；**与对照组比较，P<0.05。 3讨论 小细胞肺癌肿瘤细胞分化程度低，恶性程度高，且就诊时以中、晚期患者多见，手术难以完全切除。因此，化疗在SCLC的治疗中占有重要地位。VP16是S
5、CLC化疗常用药物，但在临床应用中，由于肿瘤组织对VP16存在敏感性差异或产生耐药等原因常导致化疗失败。近年来，发现许多化合物虽然本身不能抑制肿瘤细胞生长，但能增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，从而可增强化疗的疗效，被称为化疗增敏剂［4］。 目前，研究较多的化疗增敏剂为钙拮抗剂，但由于所需剂量较大，以及较明显的心脏毒副作用限制了其在临床实际应用。因此，人们把目光投向一些传统中草药的有效成分，TMP即是其中之一，电生理学研究已证实TMP也是一种钙离子拮抗剂［3］。药代动力学研究证实，TMP在体内吸收完全，分布广泛，主要集中在血流丰富的组织器官，能透过血脑屏障，在血液中消除快，主要在肝脏代谢，肾
6、脏排泄［11］。TMP已应用多年，安全性较好，临床已有大剂量应用的报告，患者耐受良好，无明显毒副作用发生［12］。 至今未见TMP与化疗药物合用对小细胞肺癌的抑制作用的研究报道。本实验研究表明：10μg/mlTMP与H446细胞作用后，H446细胞生存率为（94.50±2.31）%，无细胞毒性。VP16联用10μg/ml的TMP后，量效曲线下移，H446细胞的生存率下降。TMP联用VP16与单用VP16的抑制率比较，药物合并指数为0.85，增效倍数为4.32，表明联合用药有协同作用。 对TMP化疗增敏机制的研究表明，TMP能抑制钙离子跨膜内流、阻止细胞内钙离子增加，妨碍钙和细胞内钙受体蛋
7、白结合，具有钙拮抗作用。TMP的以上作用改变了与肿瘤细胞分化和增殖密切相关的钙恒稳状态［13］。 梁蓉等［14］的研究表明，TMP可以使HL60/VCR的bclxl基因的表达下降47%，增强细胞对VP16、阿霉素、柔红霉素、长春碱的敏感性，推测增敏作用可能与TMP的凋亡诱导有关。但TMP究竟有无增强化疗药物的凋亡诱导作用尚未进行研究。本研究采用AO/EB双荧光染色法观察凋亡，证明TMP可以增强化疗药物VP1
