环氧化酶2抑制剂联合依托泊苷对肺癌细胞增殖凋亡的影响

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1、环氧化酶2抑制剂联合依托泊苷对肺癌细胞增殖凋亡的影响作者：邢丽华,刘剑波　张惠兰，张珍祥【摘要】目的探讨环氧化酶2(COX2)抑制剂尼米舒利(NIM)与化疗药依托泊苷(VP16)联用对肺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法培养人肺癌细胞A549：①NIM（25μmol/L）与VP16（2～32μg/mL）联合，MTT试验观察干预48h后细胞增殖变化及增殖抑制率；②分为对照组、NIM组（25μmol/L）、VP16组（8μg/mL）和NIM+VP16组，观察12h、24h及48h后A549细胞生长情况，

2、描记生长曲线；流式细胞术检测干预48h后细胞凋亡率。结果①VP16能抑制肺癌A549细胞的增殖，且呈量效关系（r=-0.908,P<0.01），NIM与VP16联用后，抑增殖作用增强，二者有相加或协同作用；②NIM及VP16均可抑制A549细胞的生长，诱导凋亡，二者联用后作用增强。结论NIM与VP16联用可增强对肺癌细胞增殖的抑制和凋亡的诱导，二者具有协同抗肿瘤作用。【关键词】肺癌；凋亡；增殖；环氧化酶2；依托泊苷TheEffectsofNimesulidebined;Apoptosis;

3、Proliferation;Cyclooxygenase2;Etoposide近20年来，肺癌已成为世界范围内发病率及病死率最高的恶性肿瘤，严重威胁着人类的健康和生命。目前由于早期诊断技术的局限，约75%～80%患者就诊时已属晚期，有效的综合治疗尤其是提高全身化疗疗效十分必要。环氧化酶2（cyclooxygenase2，COX2）是前列腺素（prostaglandins，PGs）生物合成过程中一个重要的限速酶，与肿瘤发生发展关系密切，而COX2抑制剂可增强一些肿瘤细胞对化疗药物的敏感性[1]。本研究拟

4、探讨COX2抑制剂尼米舒利(nimesulide,NIM)与肺癌常用化疗药依托泊苷（etoposide,VP16）联用对肺癌细胞增殖与凋亡的作用，以期为肺癌的临床治疗提供基础理论依据。1材料与方法1.1细胞培养人肺癌细胞株A549（购自武汉大学典型生物冷藏中心），用含10%新生牛血清（武汉三利生物制品厂）、100u/mL青霉素及100u/mL链霉素的RPMI1640培养基（Gibco公司），于37℃、5%CO2培养箱内培养，细胞为贴壁生长，0.25%胰蛋白酶（Gibco公司）消化传代。1.2MTT比色

5、法检测A549细胞增殖及增殖抑制率取对数生长期A549细胞按1×104/孔接种于96孔培养板，每孔加液量200μL。24h后换液，设空白调零组：不接种细胞；对照组：只含等量溶剂；实验组：NIM（Sigma公司）25μmol/L与VP16（山东齐鲁制药厂）2～32μg/mL联用，每组设6个复孔。培养48h后加入MTT（5mg/mL）20μL,继续培养4h后吸出培养液，每孔加DMSO150μL，振荡溶解10min，待结晶完全溶解后，在ELX800酶标仪（美国BioTek公司）上选择波长490nm，空白组调零

6、，测定各孔吸光度A，计算细胞生长抑制率。抑制率＝（1－实验组A平均值/对照组A平均值）×100%。按以下公式计算Q值并判断两药的联合效应［2］：Q=E(A+B)/[EA+(1EA)EB]，其中E(A+B)为两药合用的抑制率，EA、EB为两药单用的抑制率。Q=0.85～1.15表示两药作用相加；Q>1.15表示两药作用协同；Q<0.85表示两药作用相互拮抗。1.3描绘细胞生长曲线取对数生长期A549细胞按2×105/mL接种于六孔板，24h后换液，分为4组，即对照组：未加药物；NIM组：NIM2

7、5μmol/L；VP16组：VP168μg/mL；NIM+VP16组：NIM25μmol/L+VP168μg/mL。分别于干预后12h、24h、48h各取4孔，每孔4次记数，取其平均值，描绘生长曲线。1.4流式细胞术检测细胞凋亡率取对数生长期A549细胞2×105/mL接种于培养瓶中，24h后换液，分组同1.3，各组均重复3瓶。培养48h后常规收集细胞，70%冷乙醇固定，-20℃保存。检测前PBS洗两次，RNA酶消化，PI避光染色30min，上流式细胞仪检测凋亡率。1.5统计学处理计量资料用±s表示

8、，SPSS11.0统计软件行单因素方差分析。2结果2.1细胞增殖抑制率MTT比色法检测A值结果显示，见表1。VP16单用时，即可抑制A549细胞的增殖（P均<0.01），随着浓度VP16的增加，抑制作用增大，呈量效关系（r=-0.908,P<0.01）；NIM与VP16联用后，抑制作用增大，抑制率增加。我们的前期研究结果已证实，NIM浓度为25μmol/L时，其对A549细胞增殖的抑制率为10