环氧化酶-2选择性抑制剂联合奥沙利铂对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响

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1、分类号：单位代码：10092密级：学号：20101059环氧化酶一2选择性抑制剂联合奥沙利铂对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响单位：专业：研究生姓名：导师姓名及职称：河北北方学院基础医学院病理学与病理生理学陈燕张林西教授研究起止日期：2012．4-2013．4提交日期：2013．5涮眦⋯)躞剐学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北北方学院所有。河北北方学院有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的

2、论文，第一署名单位为河北北方学院，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河：tt：iL方学院所有。否则，承担相应的法律责任。导师签名：乡起棚研究生签名：豫燕pB年，月JD日河北北方学院研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。导师签名：≥起村西研究生签名：厶凸年陈瘁．争月了D日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英

3、文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．6研究论文环氧化酶一2选择性抑制剂联合奥沙利铂对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7H

4、J舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。7材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯28讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．36综述环氧化酶在结肠癌中的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．46个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．47中文摘要环氧化酶一2选择性抑制剂联合奥沙利铂对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响摘要结肠癌是一种较为常见的消化道肿瘤，其传统的治疗原则以手术为主的综合治疗，同时联合化

6、疗、放疗等降低手术后的复发率，提高患者的生存率。对于复发性或转移性结肠癌，其中综合治疗在化疗中占主要地位。近年来研究发现环氧化酶．2(COX．2)可以通过其多种途径参与肿瘤的发生及发展，可以抑制肿瘤细胞的凋亡，促进新生血管的生成。本实验通过奥沙利铂(L．OHP)，COX-2抑制剂NS．398及奥沙利铂联合NS．398对结肠癌HCT-8细胞体外培养，研究其以上物质对细胞增殖和凋亡的影响。为初步观察与奥沙利铂联合作用的NS．398对HCT-8细胞在倒置显微镜下观察到奥沙利铂和奥沙利铂联合NS一398对结肠癌HCT-8

7、细胞的生长影响。结果出现奥沙利铂和NS一398浓度的添加使其增高的细胞逐渐减少，变圆，贴壁细胞出现漂浮，折光性差。接着运用CCK．8实验检测不同浓度奥沙利铂单用(1．25、2．50、5．oo、10．00、20．00mg．L。)，奥沙利铂联合NS．398(20．00、80．00pm01．L。)对HCT-8细胞作用24h的细胞抑制率；其运用AnnexinV-FITC和PI双染流式细胞术检测奥沙利铂(10．00mg．L√)、NS．398(50．00历譬．L√)单用及奥沙利铂联合NS一398对HCT-8细胞作用24h的早

8、期凋亡情况；并用流式细胞术检测奥沙利铂，NS。398单用及奥沙利铂联合NS．398对HCT-8细胞48h的细胞周期变化。为进一步研究观察奥沙利铂和NS．398对细胞有无协同效应，运用琼脂糖凝胶电泳检测奥沙利铂单用(2．50、5．00、10．00、20．OOmg·L。)及联合NS．398(10．00、100．OOgm01．L。)对HCT-8细胞作用48h的DNALadder情况；利用荧光显微镜观察细胞凋亡作用48h时凋亡情况。Caspase．3活性检测奥沙利铂和NS．398单用及联合作用48h时结肠癌HCT-8细胞

9、中Caspase．3活性增高的变化。实验发现：奥沙利铂，NS．398对HCT-8细胞呈剂量性的依赖抑制作用(尸<0．05)。奥沙利铂联合NS．398作用组的HCT-8细胞增殖抑制中文摘要率明显高于同一浓度的奥沙利铂单用组，并且随着NS．398添加剂量而增加。AnnexinV-FITC检测细胞早期凋亡显示奥沙利铂呈剂量依赖性的诱导细胞凋亡和细胞死亡，联合作用组对HCT-8细