选择性环氧合酶-抑制剂尼美舒利对胃癌细胞增殖的影响

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1、浙江大学硕士学位论文选择性环氧合酶-2抑制剂尼美舒利对胃癌细胞增殖的影响姓名：沈亦斌申请学位级别：硕士专业：外科学（胃肠外科）指导教师：于吉人20060401浙江大学２００６届硕士学位论文选择性环氧合酶一２抑制剂尼美舒利对胃癌细胞增殖的影响浙江大学医学院９９级七年制导师胃肠外科沈亦斌于吉人中文摘要近来研究表明在胃癌组织和癌前病变的腺瘤或增生性组织中，均发现环氧合酶一２（Ｃｏｘ一２）的高表达。体外研究发现，环氧化酶抑制剂能抑制胃癌细胞生长，改变胃癌细胞周期，从而诱导其调亡。尼美舒利（Ｎｉｍｅｓｕｌｉｄｅ），是新型的非甾体抗炎药，化学名为４一硝基一２一苯氧基

2、甲磺酰苯胺，是一种选择性ｃｏｘ一２抑制剂。本研究观察选择性环氧合酶一２（ＣＯｘ一２）抑制剂尼美舒利对人胃癌细胞株ｓＧＣ一７９０ｌ增殖的影响，并探讨其可能的机制。本实验中，培养人胃癌细胞ｓＧｃ一７９０１，在不同的时间（２４ｈ，４８ｈ，７２ｈ，９６ｈ）予以不同剂量（Ｏ，２０，５０，１００，２００，４００“ｍｏｌ／Ｌ）的尼美舒利，采用啪汀比色法测试细胞活性，应用流式细胞技术分析胃癌细胞周期变化及凋亡。实验结果显示：不同剂量（Ｏ，２０，５０，１００，２００，４００Ｈｍｏｌ几）的尼美舒利对人胃癌细胞株ｓＧｃ一７９０１的增殖均有抑制作用。２０ｕｍｏｌ／Ｌ的尼美舒利抑制

3、率最浙江大学２００６届硕士学位论文低，作用不同时间（２４ｈ，４８ｈ，７２ｈ，９６ｈ）后的抑制率分别是：１４．１％、２０．３％、２１．８％、２９．３％：４００弘ｍｏ儿的尼美舒利抑制率最高，作用不同时间（２４ｈ，４８ｈ，７２ｈ，９６ｈ）后的抑制率分别是：５７．１％、６５．９％、７８．７％、８２．３％。同时尼美舒利改变了胃癌细胞ＳＧＣ一７９０ｌ的细胞周期分布，不同浓度尼美舒利（Ｏ，２０，５０，１００，２００，４００“ｍ０１几）作用７２小时后，Ｇ２／Ｍ期细胞所占比例分别是：１０．４％、１２．２％、１４．９％、１６．５％、２０．Ｏ％、２６。７％。流式图谱显示胃癌细胞

4、ｓＧｅ一７９０１经１００、２００、４００斗ｍｏ扎的尼美舒利作用后出现明显的亚二倍体凋亡峰，调亡率分别为：１７．７％、２２．６％、７５。２％。以上实验结果表明：尼美舒利能显著抑制人胃癌细胞株ｓＧｃ一７９０ｌ的增殖，其可能枫制与诱导细胞摄亡阻止细胞周期进展有关。【关键词】：尼美舒利；胃癌细胞株；３凋亡浙江大学２００６届硕士学位论文选择性环氧合酶一２抑制剂尼美舒利对胃癌细胞增殖的影响浙江大学医学院９９级七年制导师胃肠外科沈亦斌于吉人序言流行病学资料显示：在很多胃癌组织中环氧合酶一２（ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ一２，ｃ０Ｘ一２）呈高表达状态，与胃癌的发生

5、发展有密切的关系‘１。３】。长期服用ｃ０Ｘ一２抑制剂可降低胃癌的发病危险性，具有一定的化学预防作用嗍。近年来，选择性环氧化酶一２抑制剂的抗肿瘤作用日益引起重视。尼美舒利是一种人工合成的环氧化酶一２特异性抑制剂，为磺酰胺类消炎镇痛药，能抑制炎症组织内前列腺素的合成，而不抑制胃黏膜内前列腺索的合成，因而能缓解炎症症状，对胃及十二指肠等的不良反应则较轻【５】。本研究通过ＭＴＴ、流式细胞仪、电镜等检查，观察体外尼美舒利对人胃癌细胞株ｓＧＣ一７９０ｌ的作用，并探讨其可能的作用机制，为临床上开辟新的抗癌途径提供实验室依据。６浙江大学２００６届硕士学位论文１材料和方法１

6、．１主要试剂ＭＴＴ、ＤＭｓＯ、尼美舒利（ｓｉｇｍａ公司），ＲＰＭＩ－１６４０培养基、胰蛋白酶（Ｇｉｂｃｏ公司）、小牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）。１．２主要仪器：恒温ＣＯ。培养箱（美国ＳｈｅＩｄｏｎ公司）倒置显微镜（重庆光学仪器厂）；透射电镜（日立Ｈ６００型）；流式细胞仪（ＦＡＣＳ，美国ＢＤ公司）；酶联免疫检测仪（国营华东电子管厂）一７０℃冰箱购于美国Ｆｏ衄ａｓｃｉｅ埘ｆｉｃ公司。１．３细胞培养：人胃癌细胞株ＳＧＣ．７９０１购自中科院上海细胞库。ＳＧＣ．７９０１细胞以ＲＰＭＩ．１６４０培养基，加入１０％小牛血清和ｌｏｏｕ／ＩＩｌｌ青霉素及１００ｍ

7、ｇ／血链霉素，于３７℃、５％ｃ０２孵箱内培养，２～３天传代一次。１．４ＭＴＴ法检测尼美舒利对ｓＧｃ．７９０１细胞抑制率的影响取对数生长期ｓＧＣ．７９０１细胞制成细胞悬液，以每孑Ｌ５×１０４个细胞接种于９６孔板。培养２４ｈ后分别加入不同浓度的尼美舒利（０，２０，５０，１００，２００，４００¨ｍｏ儿），每种浓度设４个复孔。继续培养２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ、９６ｈ后，每孔分别加人ＭＴＴ（５ｍ咖１）２０Ｉｌｌ，继续孵育４ｈ后弃上清，加入二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）１５０¨ｌ，振荡１０分钟，用酶标仪测定５７０ｎｍ波长处的吸光值（ｏ埘ｃａｌｄｅｎｓ时ｖａｌｕｅ，ＯＤ值）。７

8、浙江大学２００６届硕士学位论文２．结果２．１倒置显微镜观察尼美舒