rna干扰抑制结肠癌livin的表达及对细胞增殖的影响

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1、重庆医科大学硕士研究生学位论文were67．15％．Foay-eighthoursaftersi-Livin2transfection，theproliferationofliT-29cellswasstronglyinhibited．withtheinhibitingrateof28．6％．ThecellpercentageoftheGo／G,phase(64．70-a：2．60)％wasincreasedandtheSphase(28．77+2．70)％wasdecreased．Conclusion：TheexpressionofLivincould

2、beinhibitedbyRNAinterference．Livin—targetedRNAicallinhibitproliferationinHT-29cells．Keywords：RNAinterference、Livin、Coloncarcinoma4重庆医科大学硕士研究生学位论文RNA干扰抑制结肠癌Livin的表达及对细胞增殖的影响前言将外源性或内源性双链RNA(double．strandedRNA，dsRNA)导人细胞后引起与该段RNA同源的mRNA产生特异性降解，其相应的基因受到抑制，这种发生在转录后的基因沉默现象【l】被称之为R．NA干扰

3、。RNAi普遍存在于自然界中，1998年Fire等将dsRNA注射到秀丽新线虫体内，能高效、特异地阻断相应基因的表达，其抑制效率比纯化后的反义RNA至少要高2个数量级。随后发现在各种生物如拟南芥菜、果蝇、真菌、小鼠胚胎细胞以及哺乳动物细胞中均存在RNAi现象。随着研究的不断深入，RNAi在基因功能研究尤其是肿瘤相关基因研究及在肿瘤治疗中的应用方面将有着潜在的巨大应用价值。基因的改变是肿瘤发生和发展的分子基础，研究癌症发生和发展相关基因的功能成了如今肿瘤研究的热门领域。肿瘤相关基因包括：①细胞癌基因，也称原癌基因。原癌基因的激活机制有：点突变，获得启动子，

4、DNA碱基修饰的变化，基因扩增，基因异位或重排，转录后的调控异常；②病毒癌基因：③抑癌基因，抑癌基因的作用是抑制细胞生长和促进细胞分化，从而对肿瘤的发生起抑制作用，这种抑制作用的机制也可能包括抑制原癌基因的活化及表达，或使癌基因表达蛋白产物失活，从而对细胞恶性转化起负调节，抑癌基因的变异表现出功能的减弱或丧失，从而构成某些致癌的共同途径。常见的有RB基因、P53基因、NFI基因、DCC基因、P16基因等等；④细胞周期和凋亡相关基因以及端粒酶活性调控基因，细胞衰老凋亡是保证多细胞生物个体正常发育成熟和维持正常生理过程必需的，这一过程失调不仅可使生物个体失去

5、机体的稳定性，还会是许多人类严重疾病尤其是恶性肿瘤的根源。常见的凋亡相关基因有ced、bel．2、P53、c．myc等，而对端粒酶活性研究最多的是其催化亚基，其编码基因为hTERT；⑤肿瘤浸润、转移及肿瘤血管生长相关基因；⑥肿瘤药物抗性基因。细胞凋亡机制非常复杂，其过程受到严密的多方面控制；基因异常改变使细胞凋亡受抑制，最终导致肿瘤的发生和演进121。胱氨酸蛋白酶(Caspases)的级联激活是凋亡过程的关键环节之一。Bcl．2家族蛋白和IAPs家族蛋白是控制Caspases5重庆医科大学硕士研究生学位论文蛋白酶激活的主要因素。某些IAPs成员异常高表达

6、常引起组织细胞凋亡受阻，与肿瘤的发生密切相关。Livin是新近发现的一个IAP家族成员，与多种肿瘤的发生密切相关。Livin是由Lin等13J根据IAPs同源序列，用含有BIR序列的EST克隆，在人胎肾eDNA文库中发现的该基因家族的新成员。Livin基因位于人染色体20q13．3，全长4．6kb，含7个外显子，基因转录产物mRNA长1．4kb，Livin蛋白N端仅包含一个BIR结构，C端含1个RING环指结构。Livina和Livinp分别由298和280个氨基酸组成，二者相差的18个氨基酸由介于BIR和RING结构之间的第6外显子5’端54bp的基因

7、序列编码。Livina和Livinp蛋白相对分子质量(Mr)分别为39000和37000。与IAP的其他成员作用相似，Livin主要通过阻断Caspases级联反应抗细胞凋亡，作用的关键部位是BIR结构域。Livin可与介导细胞凋亡的Caspases的激活形式Caspases．3和Caspases．7结合，抑制其活性。Livin不能与未加工的Caspases．9结合，抑制由Apaf-1(apoptosisproteinactivatingfactor-1)，细胞色素C及dATP诱导的Caspases9激活作用。因BIR结构域的完整，Livin与Caspa

8、ses的结合抑制作用具有高度的特异性和亲和性，BIR结构域内单个氨基酸突变即可导